Proteomic analysis of mammary cells throughout differentiation

• Main Author: Ribeiro, Miguel Costa
• Publication Date: 2011
• Format: Master thesis
• Language: eng
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10773/7229
• topic: Bioquímica; Proteómica; Glândulas mamárias; Diferenciação celular; Estrogénios; Apoptose

A sinalização paracrina e autocrina desempenha um papel importante na proliferação, diferenciação e apoptose das células epiteliais mamárias. Apesar de este facto ser globalmente aceite os mecanismos pelos quais estes processos ocorrem ainda não são totalmente compreendidos. Em particular, a acção dos estrogénios através do receptor de estrogénio alpha (ERα) e beta (ERβ) afectam profundamente a proliferação e diferenciação; no entanto o papel do ERβ nestes processos é ainda pouco conhecido. Com o objectivo de melhor compreender os mecanismos de sinalização envolvidos na diferenciação das células epiteliais mamárias fez-se a recolha do meio condicionado (CM) de células HC11 nas 3 etapas de diferenciação: stem-cell like (SCL), predifferenciadas (PD) e funcionalmente diferenciadas (D). Em seguida, as proteínas do CM foram separadas com recurso a SDS-PAGE e 2D-PAGE e identificadas por MALDI-TOF/TOF. Os nossos resultados mostram que células em SCL segregam factores que possuem um papel pró-angiogenico/invasor e de sobrevivência, bem como outros factores que desempenham a função oposta. Estes resultados estão de acordo com o estado activo de proliferação e migração observado nestas células. Com o inicio da diferenciação (células em PD e D) ocorreu uma mudança nas proteínas mais secretadas, sendo possível observar um aumento do nível de proteínas que regulam a adesão e apoptose. Para estudar os mecanismos regulados pelo ERβ, o CM de células não diferenciadas, bem como de células a entrar em diferenciação (- EGF) e totalmente diferenciadas (D) foi recolhido após a activação do ERβ por ligandos. As proteínas presentes no CM foram novamente separadas por SDS-PAGE e 2D-PAGE e identificadas por MALDITOF/ TOF. Os nossos resultados mostraram uma diferença nos níveis de proteínas segregadas em SCL+EGF quando comparado com SCL-EGF, indicando que as vias metabóicas que mantêm as células numa condição indiferenciada como o EGF também comunicam com a sinalização activada por ERβ. Além disso, em concordância com SCL-EGF, as células em D, as proteínas reguladas pelo ERβ estavam relacionadas com adesão e apoptose indicando que o estado celular de diferenciação modula a sinalização do ERβ; sendo que o já identificado papel de supressor tumoral do ERβ é desencadeado apenas quando as células começam a diferenciar.