Role of somatostatin receptors in angiogenesis

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Alonso, Isis Legath
Data de Publicação: 2008
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1822/9050
Resumo: Dissertação de mestrado em Genética Molecular
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spelling Role of somatostatin receptors in angiogenesis577.21Dissertação de mestrado em Genética MolecularSomatostatin and related peptides belong to a family of compounds that modulate endocrine and exocrine secretions affecting the release of many hormones, presenting an inhibitory effect, acting on cell growth, differentiation, proliferation and apoptosis via 5 G-protein-linked receptors (SSTR 1 to 5). These peptides also act by indirect mechanisms that inhibit release of growth factors. Synthetic enzymatically stable analogs were designed due to the very short half-life of somatostatin. As the native molecule, these analogs interact with the specific SSTRs, detected in a considerable number of tumoral tissues. Somatostatin and its analogs also inhibit angiogenesis, being potential targeting molecules for anti-angiogenic therapy (one of the potential mechanisms of antitumoral action). The purpose of this work was to explore the role of somatostatin receptors in angiogenesis, by evaluating the effects of somatostatin analogs in endothelial cell viability, migration, cell death and apoptosis, and expression of somatostatin receptors. Endothelial cell viability along time and upon different analogs concentrations was assessed by exclusion method of tripan blue, and cell death was evaluated by TUNEL assay. In cells exposed to pasireotide, the decrease in cell viability and the increase in cell death were significantly marked in comparison to cells exposed to octreotide. Apoptosis was evaluated by Anexin V-FITC and a significant higher apoptotic index was obtained for cells exposed to octreotide than to pasireotide. This might suggest that pasireotide induced apoptosis earlier than octreotide. This might be an interesting issue to study further, but the most important is that both drugs could induce apoptosis significantly. Cell migration was analyzed by wound-healing assay and it was observed that the presence of both analogs inhibited migration significantly after 6 and 12h of incubation, suggesting that this particular behaviour might be observed in vivo, preventing during a certain period of time the formation of new blood vessel through the inhibition of proliferation and migration of the endothelial cells. There were no reports on the behaviour of SSTRs expression after endothelial cell exposure to octreotide and pasireotide. In this work, a significant decrease in the expression of SSTR 1 in cells treated with pasireotide was observed, while cells exposed to octreotide did not present a significant difference in SSTR 1 expression. The vi expression of SSTR 2 in cells treated with pasireotide and octreotide was significantly lower comparing with control cells. SSTR 3 expression was not the expected with an apparent upregulation of the receptor in cells exposed to octreotide, while in untreated cells and in cells treated with pasireotide the expression was residual. Expressions of SSTR 4 and 5 were residual under the conditions tested. The results obtained are probably related to the pattern of SSTR expression in the HUVECs used. From our results, we could conclude that the absence of expression of SSTR 5 is not impeditive to the inhibitory action of somatostatin analogs on proliferation of endothelial cells that express other SSTRs, especially SSTR 2 and the somatostatin analogs used present high affinity for this receptor.A somatostatina e péptidos relacionados pertencem a uma família de compostos que regulam as secreções endócrina e exócrina, afectando a libertação de hormonas por inibição, actuam no crescimento, diferenciação e proliferação celular e induzem a apoptose via receptores ligados a proteína G (SSTR 1 a 5). Estes péptidos também actuam através de mecanismos indirectos que inibem a libertação de factores de crescimento. Devido ao curto tempo de semi-vida da somatostatina, foram concebidos análogos sintéticos, enzimaticamente estáveis que, tal como a molécula nativa, interagem com os SSTRs específicos, detectados num número considerável de tecidos tumorais. A somatostatina e seus análogos também inibem a angiogénese, o que faz destes compostos potenciais agentes de terapêutica anti-angiogénica (um dos principais mecanismos da acção anti-tumoral). O objectivo deste trabalho foi explorar o papel dos receptores da somatostatina na angiogénese, através da avaliação dos efeitos dos análogos da somatostatina (octreotídeo e pasireotídeo) na viabilidade, migração, morte celular, apoptose e expressão dos SSTRs nas células endoteliais. A viabilidade das células endoteliais foi avaliada ao longo do tempo e sob diferentes concentrações dos análogos através do método de exclusão do tripan blue e a morte celular foi estudada através do método TUNEL. Nas células expostas ao pasireotídeo, a diminuição na viabilidade celular e o aumento na taxa de morte celular foram acentuados e significativos em comparação com as células expostas ao octreotídeo. A apoptose foi avaliada através da Anexina V-FITC e o índice apoptótico observado foi significativamente maior para as células expostas ao octreotídeo do que para as expostas ao pasireotídeo. Isto poderá sugerir que o pasireotídeo tenha induzido a apoptose mais cedo do que o octreotídeo. Este poderá ser um estudo interessante para ser aprofundado, no entanto, o mais importante é que ambos os análogos sejam capazes de induzir a apoptose de modo significativo. A migração celular foi analisada pelo método de wound-healing e observou-se que a presença dos análogos inibiu de modo significativo a migração celular, sugerindo que este comportamento particular poderá viii ser observado in vivo, evitando a formação de novos vasos sanguíneos através da inibição da proliferação e migração das células endoteliais. Não há publicações sobre o comportamento da expressão dos SSTRs após a exposição das células endoteliais ao octreotídeo e pasireotídeo. Neste trabalho, foi observada uma diminuição significativa na expressão do SSTR 1 nas células tratadas com o pasireotídeo, sendo que para as células expostas ao octreotídeo a diferença de expressão não foi significativa. A expressão do SSTR 2 nas células tratadas com ambos os análogos foi significativamente menor comparando com as células não tratadas. A expressão do SSTR 3 não foi a esperada, com uma aparente sobre-regulação do receptor nas células expostas ao octreotídeo e expressão residual nas células não tratadas e nas tratadas com o pasireotídeo. Tanto o SSTR 4 como o SSTR 5 apresentaram expressões residuais sob as condições testadas. Os resultados obtidos estão provavelmente relacionados com o padrão de expressão dos SSTRs nas HUVEC utilizadas. Dos nossos resultados, podemos concluir que a ausência de expressão do SSTR 5 não impede o efeito inibidor dos análogos da somatostatina na proliferação das células endoteliais que expressem outros SSTRs, principalmente o SSTR 2, e quando os análogos utilizados apresentam elevada afinidade para este receptor.Baltazar, FátimaUniversidade do MinhoAlonso, Isis Legath2008-12-182008-12-18T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1822/9050enginfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)instname:FCCN, serviços digitais da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologiainstacron:RCAAP2024-05-11T06:55:36Zoai:repositorium.sdum.uminho.pt:1822/9050Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireinfo@rcaap.ptopendoar:https://opendoar.ac.uk/repository/71602025-05-28T16:08:57.610772Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP) - FCCN, serviços digitais da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologiafalse
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