Análise da histona H2A tipo 2-C na diferenciação celular e no cancro da mama

• Main Author: Lopes, Celestina Gomes
• Publication Date: 2012
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10773/10881
• topic: Bioquímica; Glândulas mamárias; Epigenética; Histonas; Células epiteliais; Diferenciação celular; Cancro da mama

A glândula mamária é um órgão secretor complexo cujo desenvolvimento morfológico e funcional produz-se logo ao nascimento e em estádios bem definidos, a saber: a puberdade, a gravidez e lactação. O presente estudo teve como objetivo analisar a expressão de histona H2A tipo 2-C nas células epiteliais de rato doméstico HC11 durante o processo de diferenciação, e nas células do cancro de mama humano MDAMB- 231. O nível de expressão de histona H2A tipo 2-C estudouse com as técnicas de Western Blot e imunohistoquímica. Com este fim, primeiro, procedeu-se à validação do anticorpo utilizando histona H2A tipo 2-C recombinante. Logo, analisarem-se células HC11 em fase de proliferação / pouco diferenciadas (SC-L), prédiferenciadas (PD) e funcionalmente diferenciadas (DIF), bem como das células do cancro da mama MDA-MB-231 pouco diferenciadas e tecido mamário de rato doméstico. Foi observado a expressão de histona H2A tipo 2-C apenas no estádio SC-L em células HC11, e em células do tecido mamário do rato doméstico apenas no estádio de prenhez caracterizado por alta proliferação. Histona H2A tipo 2C também foi detetada em células de cancro MDA-MB-231. Os estádios caracterizados pelo expressão de histona estão associados a ativação das vias MEK ½ / ERK ½ MAPkinase e PI3K / AKT pelo recetor de fator de crescimento epidérmico. A via p38-MAPcinase também e alvo de ativação nestas células. Procedeu-se ao uso de inibidores destas vias: UO126 (inibidor MEK ½), LY294002 (inibidor PI3K) e SB203580 (inibidor p38) para avaliar o efeito das mesmas sobre a expressão de histona H2A tipo 2-C. A expressão de histona resultou ser dependente do funcionamento das três vias. Os resultados indicam que a histona H2A tipo 2-C é ativada pelas vias MEK ½ / ERK ½, PI3K/AKT e p38-MAPcinase em células pouco diferenciadas em ativa proliferação e apontam à análise expressão da mesma como futuro alvo de estudos para identificar marcadores de progressão no cancro da mama.