Avaliação de i-motif no gene B-MYB como uma terapia inovadora para o cancro de pulmão

• Main Author: Alves, André Filipe Amaral
• Publication Date: 2023
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10400.6/13896
• topic: B-Myb; Biofísica; Cancro do Pulmão; I-Motif; Ligandos

O cancro do pulmão é um dos mais diagnosticados e mortais em todo o mundo. Os protooncogenes desempenham funções importantes tais como reguladores do crescimento celular normal, a divisão e a apoptose. No entanto os proto-oncogenes podem dar origem a oncogenes e levar ao crescimento celular descontrolado, o que pode resultar no desenvolvimento de cancro. Oncogenes têm um papel crucial no desenvolvimento do cancro. B-MYB é um proto-oncogene que codifica um fator de transcrição crucial na proliferação e diferenciação celular. Em células do cancro do pulmão este gene encontra-se com níveis de expressão elevados. De forma a controlar a expressão de oncogenes tem surgido interesse em estudar estruturas não-canónicas de ácidos nucleicos. A estrutura i-motif (iM) tem interesse como possível alvo terapêutico, uma vez, que há sugestões que indicam que estas estruturas estão envolvidas em processos biológicos como a transcrição. Este trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar a estrutura iM no gene B-MYB assim como estudar a interação/estabilização na presença de ligandos. De maneira a alcançar estes objetivos, foi primeiramente realizada uma análise bioinformática do gene B-MYB onde foram identificadas regiões promissoras de estruturas de iM. Após a análise bioinformática foram realizados estudos de caracterização biofísica tais como dicroísmo circular (CD), UV, ressonância magnética nuclear e PAGE. Posteriormente foi determinada a estabilização das sequências na presença de vários ligandos (acridinas, porfirinas, fenantrolinas) por FRET-melting e CD e afinidade através da técnica de ressonância plasmónica de superfície (SPR) baseada num biossensor ótico e espetroscopia de fluorescência. Por fim foi estudada a interação dos ligandos selecionados (TMPyP4 e 360A) na linha celular A549. Os resultados da análise bioinformática demonstraram 6 regiões promissoras para a formação da estrutura iM. Através da caracterização biofísica foi demonstrado que 5 formam a estrutura iM. O ensaio da interação de ligandos na linha celular A549 mostrou que o ligando TMPyP4 induz a formação da estrutura i-motif nas células. O ligando 360A não apresentou grande diferença em relação ao controlo, concluindo assim que este ligando não induz a formação do iM nesta linha celular.