Comparação da análise morfológica de embriões humanos de processos de procriação medicamente assistida com o perfil molecular do meio de cultura

• Main Author: Santos, Joana de Sousa Emídio dos
• Publication Date: 2018
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10400.21/10168
• topic: Embrião; Embryo; Espetroscopia de FTIR; Spectroscopy FTIR; Fertilização in vitro; In vitro fertilization

Apesar dos avanços na tecnologia de procedimentos de procriação medicamente assistida (PMA), a taxa de nados vivo em relação ao número de embriões transferidos é ainda bastante baixa. É assim crucial desenvolver uma nova técnica para prever a capacidade de o embrião implantar em relação à técnica convencional de análise da morfologia por microscopia ótica. A nova técnica deve ser não-invasiva, rápida, económica e simples de se aplicar em contexto clínico e, ao mesmo tempo, exceder a capacidade de previsão do método convencional. Neste âmbito, foi avaliada se a análise de meios de cultura in vitro do embrião por espectroscopia de infravermelho médio permitia prever: a morfologia do embrião ao dia 3 e 5 ou 6 de desenvolvimento; ao dia 3 a chegada do embrião a blastocisto; ao dia 5/6 a capacidade de nidificação do embrião. O projeto não interferiu com o procedimento de rotina da clínica de PMA, baseando-se numa análise retrospetiva, que correlacionou a classificação morfológica dos embriões e a eventual gravidez com o espectro do meio de cultura descartado. Utilizaram-se meios de cultura descartados de 123 embriões, obtidos ao dia 3 e ao dia 5 ou 6 de cultura, de 12 pacientes submetidas a tratamentos de PMA de fertilização in vitro ou injeção intracitoplasmática de esperma, utilizando-se óvulos de ciclos a fresco ou vitrificados de dadoras, e de embriões mantidos em cultura individual ou de grupo. Devido a esta grande diversidade de processos de PMA (por exemplo de cultura individual versus em grupo), houve sempre uma reduzida dimensão da amostra, limitando a análise estatística subsequente. Foram avaliados quer os espectros (pré-processados por correção de linha de base e de normalização), quer a 2ª derivada dos espectros. Foi observado uma elevada sensibilidade da análise de espectroscopia do meio de cultura em detetar no espectro variações metabólicas dos diferentes embriões. Por exemplo, foram observadas diferenças espectrais significativas entre embriões obtidos de óvulos não vitrificados e vitrificados. Visualizaram-se regiões espetrais características de embriões de cultura individual com boa e má qualidade ao dia 3 de desenvolvimento, e diferenças na 2ª derivada de espetros de meios de cultura de embriões que implantaram e que não implantaram. Dos estudos efetuados, foi possível identificar razões espectrais que permitiram discriminar a uma significância de 10% a qualidade dos embriões ao dia 3, e da chegada a blastocisto ao dia 5/6. A espectroscopia de infravermelho médio revela-se assim muito promissora para avaliar o estado metabólico do embrião.