Potencial atenuação da virulência de Aliarcobacter butzleri por probióticos

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Main Author: Vieira, Alexandre Almeida
Publication Date: 2024
Format: Master thesis
Language: por
Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
Download full: http://hdl.handle.net/10400.6/14584
Summary: Aliarcobacter butzleri é uma bactéria de Gram-negativo, pertencente ao género Aliarcobacter e à família Arcobacteraceae, que foi descrita pela Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas de Alimentos como sendo de risco moderado para a saúde humana. A. butzleri é considerado um enteropatógeno e como tal deve atravessar o trato gastrointestinal para atingir o local de colonização. Ao atravessar o trato gastrointestinal esta poderá encontrar uma variedade de barreiras de diferentes origens como o pH, os sais biliares ou probióticos. Os probióticos são bactérias consideradas benéficas para a saúde humana, podendo afetar a virulência das bactérias patogénicas. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos dos probióticos na sobrevivência e virulência de A. butzleri. Para tal começou por se avaliar os efeitos das condições de crescimento das espécies de probióticos, neste caso “lactobacilos”, em estudo (Lactiplantibacillus plantarum, Limosilactobacillus reuteri e Lactobacillus acidophilus), no crescimento, e efeito inibitório do sobrenadante sobre quatro estirpes de A. butzleri. No geral, não se verificou uma diferença significativa na inibição de crescimento de A. butzleri. De seguida, a tolerância das quatro estirpes de A. butzleri e das três espécies de “lactobacilos” a pH acídico e a sais biliares foi analisada, com os resultados demonstrando uma maior resistência das espécies de “lactobacilos” a pH ácido quando comparado com A. butzleri, mas uma maior suscetibilidade aos ácidos biliares. No entanto, dependendo das condições ambos os microrganismos poderão ser capazes de ultrapassar as condições adversas do percurso do trato gastrointestinal. O efeito dos sobrenadantes livres de células (SLC) dos probióticos no crescimento de A. butzleri foi explorado, tendo-se observado um efeito de inibição sobre o crescimento, provavelmente devido as alterações de pH no meio causadas pelas espécies probióticas em estudo. Também, quando em cocultura ocorre uma inibição do crescimento de A. butzleri com todas as espécies de “lactobacilos” em estudo. Por sua vez, quando é estudado o efeito dos SLC dos “lactobacilos” na formação de biofilme de A. butzleri, os resultados são variáveis, dependendo da espécie em estudo, existindo potenciação, inibição ou não havendo alteração da formação de biofilme de A. butzleri. No entanto, salienta-se o potencial de potenciação da formação de biofilme do SLC de L. plantarum. Por último foi avaliado o efeito dos “lactobacilos” na virulência de A. butzleri, na competição, deslocamento e exclusão por adesão e invasão a células Caco-2. Quando em competição, verificou-se uma incapacidade de as espécies probióticas afetarem a adesão da estirpe de A. butzleri, tendo-se observado, no entanto, um efeito inibitório de A. butzleri na adesão de L. acidophilus e de L. plantarum. No ensaio de deslocamento e exclusão foi demonstrado uma diminuição da adesão de A. butzleri, ocorrendo deslocação pelas três estirpes de lactobacilos, mas com L. acidophilus sendo incapaz de levar a exclusão da adesão de A. butzleri. Quanto ao processo de invasão não se observou efeito, quer no ensaio de competição, quer no de deslocamento ou exclusão. Em suma, neste trabalho foi demonstrado que os probióticos poderão ter um importante papel na limitação do crescimento de A. butzleri, e mesmo na resistência à colonização, mas não nas características de virulência avaliadas, como a formação de biofilme, pelo que ainda serão necessários estudos adicionais para complementar e clarificar estes resultados.
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Para tal começou por se avaliar os efeitos das condições de crescimento das espécies de probióticos, neste caso “lactobacilos”, em estudo (Lactiplantibacillus plantarum, Limosilactobacillus reuteri e Lactobacillus acidophilus), no crescimento, e efeito inibitório do sobrenadante sobre quatro estirpes de A. butzleri. No geral, não se verificou uma diferença significativa na inibição de crescimento de A. butzleri. De seguida, a tolerância das quatro estirpes de A. butzleri e das três espécies de “lactobacilos” a pH acídico e a sais biliares foi analisada, com os resultados demonstrando uma maior resistência das espécies de “lactobacilos” a pH ácido quando comparado com A. butzleri, mas uma maior suscetibilidade aos ácidos biliares. No entanto, dependendo das condições ambos os microrganismos poderão ser capazes de ultrapassar as condições adversas do percurso do trato gastrointestinal. O efeito dos sobrenadantes livres de células (SLC) dos probióticos no crescimento de A. butzleri foi explorado, tendo-se observado um efeito de inibição sobre o crescimento, provavelmente devido as alterações de pH no meio causadas pelas espécies probióticas em estudo. Também, quando em cocultura ocorre uma inibição do crescimento de A. butzleri com todas as espécies de “lactobacilos” em estudo. Por sua vez, quando é estudado o efeito dos SLC dos “lactobacilos” na formação de biofilme de A. butzleri, os resultados são variáveis, dependendo da espécie em estudo, existindo potenciação, inibição ou não havendo alteração da formação de biofilme de A. butzleri. No entanto, salienta-se o potencial de potenciação da formação de biofilme do SLC de L. plantarum. Por último foi avaliado o efeito dos “lactobacilos” na virulência de A. butzleri, na competição, deslocamento e exclusão por adesão e invasão a células Caco-2. Quando em competição, verificou-se uma incapacidade de as espécies probióticas afetarem a adesão da estirpe de A. butzleri, tendo-se observado, no entanto, um efeito inibitório de A. butzleri na adesão de L. acidophilus e de L. plantarum. No ensaio de deslocamento e exclusão foi demonstrado uma diminuição da adesão de A. butzleri, ocorrendo deslocação pelas três estirpes de lactobacilos, mas com L. acidophilus sendo incapaz de levar a exclusão da adesão de A. butzleri. Quanto ao processo de invasão não se observou efeito, quer no ensaio de competição, quer no de deslocamento ou exclusão. Em suma, neste trabalho foi demonstrado que os probióticos poderão ter um importante papel na limitação do crescimento de A. butzleri, e mesmo na resistência à colonização, mas não nas características de virulência avaliadas, como a formação de biofilme, pelo que ainda serão necessários estudos adicionais para complementar e clarificar estes resultados.Aliarcobacter butzleri is a Gram-negative bacterium, belonging to the genus Aliarcobacter and the Arcobacteraceae family, which was described by the International Commission on Microbiological Food Specifications as being of moderate risk to human health. A. butzleri is considered an enteropathogen and to reach the site of colonization must cross the gastrointestinal tract. When crossing the gastrointestinal tract, it may encounter a variety of barriers of different origins, such as pH, bile salts or probiotics. Probiotics are bacteria considered beneficial to human health and can affect the virulence of pathogenic bacteria. Therefore, this work aimed to evaluate the effects of probiotics on the survival and virulence of A. butzleri. To this end, we began by evaluating the effects of the growth conditions of the probiotic species, in this case “lactobacilli”, under study (Lactiplantibacillus plantarum, Limosilactobacillus reuteri and Lactobacillus acidophilus), on the growth and the inhibitory effect of the supernatant on four strains of A. butzleri, with no significant difference being observed in the inhibition of growth of A. butzleri. Next, the tolerance of the four strains of A. butzleri and the three species of “lactobacilli” to acidic pH and bile salts was analyzed, with the results demonstrating greater resistance of the “lactobacilli” species to acidic pH when compared to A. butzleri, but a greater susceptibility to bile acids. However, depending on the conditions, both microorganisms may be able to overcome the adverse conditions of the gastrointestinal tract. The effect of cell-free supernatants (CFS) of probiotics on the growth of A. butzleri was explored, and an inhibition effect on growth was observed, probably due to pH changes in the medium caused by the probiotic species under study. Also, when in coculture there is an inhibition of the growth of A. butzleri with all species of “lactobacilli” under study. In turn, when the effect of CFS from “lactobacilli” is studied on A. butzleri biofilm formation, varying results occur depending on the species under study, with potentiation, inhibition or no change in A. butzleri biofilm formation. However, the potential to enhance biofilm formation of L. plantarum CFS is highlighted. Finally, the effect of “lactobacilli” on the virulence of A. butzleri in competition, displacement and exclusion by adhesion and invasion of Caco-2 cells was evaluated. When in competition, there was an inability for probiotic species to affect the adhesion of the A. butzleri strain, although A. butzleri had an inhibitory effect on the adhesion of L. acidophilus e de L. plantarum .. In the displacement and exclusion assay, a decrease in the adhesion of the A. butzleri strain was demonstrated, with displacement occurring by the three lactobacilli strains, but with L. acidophilus being unable to lead to the exclusion of A. butzleri adhesion. Regarding invasion, no effect was observed in competition, displacement or exclusion tests. In sum, in this work it was demonstrated that probiotics may have an important role in limiting the growth of A. butzleri and even in resistance to colonization, but not in the studied virulence traits, such as biofilm formation, so additional studies will still be needed to complement and clarify these results.Ferreira, Susana Margarida ParaísoDomingues, Fernanda da ConceiçãoSousa, Mónica Alexandra deuBibliorumVieira, Alexandre Almeida2024-07-152024-06-112025-06-11T00:00:00Z2024-07-15T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.6/14584urn:tid:203721039porinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)instname:FCCN, serviços digitais da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologiainstacron:RCAAP2025-03-11T15:02:09Zoai:ubibliorum.ubi.pt:10400.6/14584Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireinfo@rcaap.ptopendoar:https://opendoar.ac.uk/repository/71602025-05-29T01:22:54.005891Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP) - FCCN, serviços digitais da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologiafalse
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