Implementação da técnica da PCR em tempo real para quantificação da carga viral do HHV-8/KSHV em pacientes infectados pelo HIV

• Main Author: Perlingeiro, Raíssa de Moraes
• Publication Date: 2021
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Download full: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/63202
• topic: AIDS; HIV; Sarcoma de Kaposi; KSHV; HHV-8; KICS; AIDS; HIV; Kaposi’s Sarcoma; KSHV; HHV-8; KICS; HIV; Herpesvirus Humano 8; Sarcoma de Kaposi

Introdução: O Sarcoma de Kaposi (SK) é a mais frequente neoplasia em pacientes vivendo com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) hoje, ainda que sua incidência tenha declinado desde a implementação da terapia antirretroviral (TARV), e continua sendo grande causa de morbimortalidade. O vírus denominado KSHV (Kaposi Sarcoma HerpesVirus) é o causador do SK e de outras doenças como a Doença Multicêntrica de Castleman e o linfoma de efusão primária, que podem ter apresentação clínica muito grave. A quantificação da carga viral do KSHV através do método da PCR (do inglês, polimerase chain reaction) pode ser usada no diagnóstico diferencial de doenças graves associadas a esse vírus. Justificativa: Sendo o Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas (INI) um serviço de referência para o tratamento de SK e AIDS, a quantificação do KSHV pela técnica da PCR é muito importante para o diagnóstico diferencial nos pacientes graves, agilizando a tomada de conduta terapêutica. Objetivo Geral: Implementar a técnica da PCR em tempo real para quantificação da carga viral do KSHV, em plasma ou soro, de pacientes infectados pelo HIV e diagnóstico de Sarcoma de Kaposi, que apresentem formas clínicas graves, bem como para auxiliar no diagnóstico de outras doenças associadas ao KSHV. Metodologia: Amostras de material biológico (plasma EDTA e soro) coletadas de pacientes que iniciaram tratamento quimioterápico para SK no INI do ano de 2011 a 2013 foram processadas para realização da quantificação da carga viral do KSHV através de técnica de qPCR Resultados: Não foi possível a implementação utilizando-se metodologia de curva padrão com curva sintética fita simples por não hibridização completa com o DNA viral, o que poderia comprometer o resultado do exame. Dessa forma, foi criada uma curva sintética fita dupla que ainda precisa de aperfeiçoamento para ser implementada. Discussão: Optamos por manter a utilização do plasmídeo para quantificação da carga viral do KSHV enquanto, em projeto futuro, melhoraremos a performance da curva sintética fita dupla para que sua utilização possa ser validada, visto que essa metodologia é mais reprodutível e menos laboriosa. Conclusão: A técnica de qPCR foi padronizada para os equipamentos disponíveis na Plataforma Multiusuário do INI. Além disso, foi elaborado fluxograma para orientação da coleta do material a ser examinado, incluindo suas indicações clínicas