Análise do potencial neuroprotetor de inibidores de MAPK em células de neuroblastoma SH-SY5Y

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Rehfeldt, Stephanie Cristine Hepp
• Orientador(a): Goettert, Márcia Inês
• Banca de defesa: Timmers, Luís Fernando Saraiva Macedo, Pedrosa, Rui Filipe Pinto, Morrone, Fernanda Bueno
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso embargado
• Idioma: por
• Programa de Pós-Graduação: PPGBiotec;Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: c-Jun N-terminal kinase 3 (JNK3); Alvos terapêuticos; Inibidores da quinase; Efeito neuroprotetor; Doenças neurodegenerativas; Apoptose; Estresse oxidativo; c-Jun N-terminal kinase (JNK); Therapeutic targets; Kinase inhibitors; Neuroprotective effect; Neurodegenerative diseases; Apoptosis; Oxidative stress; c-jun N-terminale Kinase (JNK); Mitogen-aktivierte Proteinkinase (MAPK); Therapeutische Ziele; Kinase-Inhibotoren; Neuroprotektive Wirkung; Oxidativer Stress
• Área do conhecimento CNPq: CB
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10737/2973

Os tratamentos atuais para doenças neurodegenerativas (ND) são sintomáticos e não afetam a progressão da doença. Retardar esse avanço continua sendo uma necessidade crucial não atendida para os pacientes e suas famílias. Truncamento e e agregação de proteínas, metabolismo mitocondrial alterado, disfunção sináptica, estresse oxidativo, excitotoxicidade, neuroinflamação e morte celular são marcas de ND conhecidas por ativar a via de proteína quinases ativadas por mitógenos (MAPK), como a quinase N-terminal c-Jun (JNK). Nesse caso, os inibidores de JNK3 podem desempenhar um papel importante na neuroproteção. Assim, no artigo de revisão “c-Jun N-Terminal Kinase Inhibitors as Potential Leads for New Therapeutics for Alzheimer's Disease”, o papel de JNK na doença de Alzheimer foi destacado e os tratamentos experimentais baseados em inibidores de JNK sintéticos são descritos e discutidos. No entanto, os produtos naturais também se mostraram eficazes no tratamento de ND, conforme discutido no capítulo do livro "Approaches for the treatment of neurodegenerative diseases related to natural products". Esta pesquisa, portanto, teve como objetivo avaliar os efeitos neuroprotetor, antiinflamatório e antioxidante de duas moléculas (FMU200 e luteolina-7-O-glucoside (LUT7OG)) nas linhagens celulares SH-SY5Y e RAW264.7. Células SH-SY5Y indiferenciadas e diferenciadas por ácido retinóico (RA) foram pré-tratadas com FMU200 ou LUT7OG e incubadas com 6-hidroxidopamina (6-OHDA) ou peróxido de hidrogênio (H2O2). A viabilidade celular e o efeito neuroprotetor foram avaliados com o ensaio MTT. A análise de citometria de fluxo foi realizada para discriminar a apoptose celular. A geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) induzida por H2O2 ou 6-OHDA e o potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) foram avaliados pelos ensaios DCFDA e JC-1, respectivamente. A capacidade antioxidante de LUT7OG foi determinada por ensaios DPPH, FRAP, ORAC e a atividade da caspase-3 e o dano nuclear foram determinados após o tratamento com LUT7OG em células induzidas por 6-OHDA. A fosforilação de JNK foi avaliada por western blot após tratamento com FMU200 em células SH-SY5Y induzidas por H2O2. A liberação de TNF-α, IL-6 e IL-10 (efeito antiinflamatório) foi determinada em células RAW264.7 induzidas por LPS por ensaio ELISA. Em células SH-SY5Y indiferenciadas, FMU200 reverteu a neurotoxicidade induzida por 6-OHDA em cerca de 20%, enquanto LUT7OG aumentou a viabilidade celular em 13% após 24h. Em células diferenciadas por RA, o FMU200 reverteu a morte celular em aproximadamente 40% e 90% após 24 e 48h de tratamento, respectivamente, enquanto LUT7OG aumentou a viabilidade celular em aproximadamente 30% e 112% após 24 e 48h, respectivamente. FMU200 reduziu as células apoptóticas precoces e tardias, diminuiu os níveis de ROS, restaurou o ΔΨm e diminuiu a regulação do p-JNK após a exposição ao H2O2. LUT7OG mostrou uma alta atividade antioxidante e conferiu um efeito preventivo na despolarização da membrana mitocondrial, diminuiu a atividade da caspase-3 e inibiu a condensação nuclear e fragmentação contra a apoptose induzida por 6-OHDA. Em células RAW264.7 estimuladas por LPS, FMU200 e LUT7OG reduziram os níveis de TNF-α após um tratamento de 3h e aumentaram a IL-10 após 24h. Em resumo, nossos resultados mostram que FMU200 e LUT7OG protegem células de neuroblastoma SH-SY5Y contra apoptose induzida por 6-OHDA e H2O2 e protegem células de lesão celular dependente de JNK. Nossos resultados indicam que ambos os compostos podem ser úteis no tratamento de doenças neurodegenerativas.