Desenvolvimento de colunas tubulares abertas para aplicação em nano cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em tandem

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Santos, Natalia Gabrielly Pereira dos
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: colunas tubulares abertas; cromatografia miniaturizada; espectrometria de massas; mass spectrometry; miniaturized chromatography; N-nitrosaminas; N-nitrosamines; nanoLC; open tubular columns
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75135/tde-29012024-102434/

O desenvolvimento dessa tese de doutorado foi constituído por alguns dos principais trabalhos escritos pela aluna durante o período de pós-graduação, os quais podem ser considerados como temas inovadores dentro da área de cromatografia, como por exemplo, a aplicação de colunas tubulares abertas em cromatografia líquida, e o acoplamento da técnica com espectrometria de massas com ionização por impacto de elétrons. Além disso, o último capítulo trás o desenvolvimento de uma metodologia analítica para análise de N-nitrosaminas em medicamentos da classe das sartanas, impureza com potencial carcinogênico à qual vem sendo pauta de discussão e controle no mercado farmacêutico. Portanto, este trabalho visou contribuir para o desenvolvimento de colunas tubulares abertas, do tipo - WCOT, para nanoLC-ESI- MS/MS. Em um primeiro momento, foi proposta uma metodologia para a preparação dessas colunas, adaptando o método proposto por Kurt Grob às condições experimentais do laboratório. Em seguida, foi feita uma triagem de fases estacionárias para o revestimento da coluna WCOT. As fases testadas foram: OV-73, OV-17, OV-210, OV-225 e OV-275, adquiridas da Ohio Valley. Para a avaliação das colunas, os padrões de atrazina, clomazona e metolacloro foram utilizados como padrões analíticos. A fase estacionária que apresentou os melhores resultados para nanoLC-ESI-MS/MS, dentre as avaliadas, foi a OV-210 (50% trifluoropropil 50% dimetil poli siloxano), que passou para a próxima etapa do trabalho: otimização da coluna WCOT. Nessa etapa de otimização, foram avaliados parâmetros como comprimento da coluna, diâmetro interno, massa de fase estacionária para revestimento da coluna, volume de injeção e, parâmetros cinéticos como velocidade linear ótima e avaliação performance-velocidade, pelos gráficos de Van Deemter e Poppe, respectivamente. Por último, a coluna WCOT otimizada foi acoplada à uma coluna trapping empacotada, à qual possibilitou melhores resultados de separação cromatográfica. O outro trabalho experimental consistiu no desenvolvimento de uma metodologia analítica para análise de N-nitrosaminas em medicamentos, no caso, em Losartana Potássica, amplamente consumido no tratamento de hipertensão. A metodologia consistiu na automatização do preparo de amostra do tipo MEPS (microextração por sorvente empacotado) em um sistema robótico controlado por arduino. O método analítico foi desenvolvido e validado em UHPLC-APCI-MS/MS, e apresentou bons resultados de linearidade, precisão intra-dias e inter-dias, dentre outras figuras de mérito. O que mais se destaca nessa metodologia é a capacidade de high-throughput do sistema robótico, o qual permite a preparação de seis amostras simultâneas, em menos de 20 minutos, o que é um grande avanço para o monitoramento dessas impurezas em análises de rotina.