Avaliação da atividade antimicrobiana e imunomodulatória de Punica granatum Linné em dois modelos experimentais in vivo de candidose

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Almeida, Nara Lígia Martins
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Amphotericin B; Anfotericina B; Candidíase Bucal; Candidíase Invasiva; Fluconazol; Fluconazole; Invasive Candidiasis; Oral Candidiasis; Pomegranate; Romã (Fruta)
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25150/tde-25102021-151326/

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica e imunomodulatória do extrato hidroalcoólico das cascas de Punica granatum Linné em dois modelos experimentais in vivo de candidose (sistêmica e oral). Paralelamente, a presença de efeitos adversos nas administrações diárias de P. granatum foi avaliada. Testes estatísticos foram aplicados de acordo com a presença ou não de normalidade em todas as avaliações, considerando p<0,05. No modelo sistêmico, após a seleção das concentrações não tóxicas de P. granatum e de anfotericina B nas larvas de G. mellonella, foram realizados dois desenhos experimentais: profilaxia pela inoculação intra-hemocele de uma dose única de extrato, 24 horas antes da infecção por C. albicans, e terapia pela inoculação de dose única 1 hora após a infecção fúngica. Como controle, as larvas foram infectadas/não tratadas, tratadas com anfotericina B ou não infectadas/não tratadas. Ambos os tratamentos foram eficazes contra a infecção por C. albicans por meio de curvas de sobrevivência. No entanto, o efeito profilático de P. granatum resultou em maior tempo de sobrevivência do que a terapia. Na sequência, doses múltiplas do extrato foram administradas em larvas antes da infecção, resultando em maior porcentagem de sobrevivência e maior densidade de hemócitos quando comparadas às larvas infectadas e não tratadas. No modelo localizado, o perfil fitoquímico e a CIM do extrato e fluconazol foram avaliados in vitro. Para análise toxicológica, camundongos BALB/c receberam o extrato a 150 ou 300 mg/Kg, ou fluconazol a 100 mg/Kg, por gavagem, durante 7 dias. Como controle, água foi administrada. O screnning hipocrático e o peso dos animais foram mensurados diariamente. Após a eutanásia, baço, fígado e rins foram analisados microscopicamente; e marcadores bioquímicos séricos foram quantificados. Para análise antimicrobiana, animais imunossuprimidos foram infectados por C. albicans em toda cavidade oral e, após 7 dias, receberam 7 doses diárias de P. granatum. Para controle, animais infectados receberam água ou fluconazol, bem como animais não foram infectados. O peso corporal foi mensurado diariamente. Após eutanásia, baço, fígado e rins foram pesados e analisados microscopicamente, e a língua foi avaliada macroscópica, microbiológica e microscopicamente. Para análise imunomodulatória, a produção de citocinas foi mensurada nos homogenatos de linfonodos cervicais e língua por Milliplex®. Como resultado, foi identificado em P. granatum o composto punicalagina e a CIM foi mensurada em 18,75 mg/mL. Animais saudáveis que receberam fluconazol apresentaram redução do peso corporal, hepatotoxicidade e nefrotoxicidade, e aumento de TGP e triglicerídeos, diferentemente dos grupos tratados com P. granatum. A placa micelial formada na língua foi atenuada póstratamento com P. granatum ou fluconazol, acarretando na redução do número de UFC/g; consequentemente, os escores microscópicos foram mais baixos na língua dos animais tratados em relação aos controles. Ainda, o tratamento com o extrato demonstrou ser hepatoprotetor e, possivelmente, anti-inflamatório, pelo aumento de IL-10 e TGF-1, em relação aos controles da infecção. Concluindo, em ambos os modelos experimentais in vivo de candidose sistêmica e localizada, o extrato de P. granatum atuou como potente agente antimicrobiano contra C. albicans e desempenhou papel protetor, não tóxico e imunomodulador no tratamento da candidose.