Estudos estruturais de sistemas biológicos utilizando métodos de espalhamento

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Bicev, Renata Naporano
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Proteasome; Proteassomo; Proteínas; Proteins; SAXS
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/43/43134/tde-06112015-131339/

Neste trabalho serão apresentados resultados sobre três sistemas proteícos diferentes: Lisozima, Crioglobulina e Proteassomo, analisados a partir, principalmente, da técnica de espalhamento de Raios X a baixos ângulos. Técnicas como microscopia eletrônica de transmissão e espalhamento de luz dinâmico foram utilizadas como técnicas complementares. Os resultados apresentados demonstram o potencial único que a técnica de espalhamento a baixos ângulos possui no estudo de sistemas em solução. Os dados correspondem a um estudo em um grande intervalo de tamanhos para as proteínas estudadas (15kDa to 750 kDa), requerendo diferentes abordagens em cada caso. Como será mostrado, para casos onde se tem um meio monodisperso, diversas metodologias de modelagem podem ser utilizadas. Para o sistema composto de Lisozima, por se tratar de uma proteína amplamente estudada na literatura, é interesante poder comparar os resultados encontrados com os já publicados e observar sua estabilidade em solução. O peso molecular calculado a partir dos dados de espalhamento foi 15kDa, que está em bom acordo com a esperado para esta proteina (14,6 kDa). Além disso, ao variar-se a concentração da proteína em solução, é possível observar um fator de interação entre as partículas para maiores concentrações. Esse fator de interação pode ser considerado próximo ao de esferas rígidas. Para o sistema de Crioglobulinas, houve uma dificuldade na purificação da amostra, mas ainda assim apresentaremos alguns resultados interessantes, em que a técnica de SAXS fornece informações sobre a flexibilidade de proteínas e as análises para as amostras de um pool de imunoglobulinas indicou que com a diminuição da temperatura a dispersão de raios de giro aumenta, indicando a formação de agregados. Para o sistema do Proteassomo, diversas análises se mostraram possível e resultados novos puderam ser obtidos e publicados. Dos estudos utilizando MET,com as micrografias obtidas tem-se a indicação de diferenças na estrutura, quando a molécula está em condições diferentes. Das análises feitas por SAXS, é possível utilizar duas modelagens diferentes, uma simples, outra mais avançada, em que se pode concluir que a redução do Cys-PT glutatiolado induz mudanças conformacionais. Além disso, resultados de SAXS e MET estão em concordância e fornecem informações complementares.