Desenvolvimento de carreador lipídico nanoestruturado contendo pool de siRNAs associados a agente antitumoral como uma abordagem terapêutica multifuncional para o câncer de pele

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Viegas, Juliana Santos Rosa
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 5-fluorouracil; Bcl-2 siRNA; Câncer de pele; Carreador lipídico nanoestruturado; EGFR siRNA; Gene therapy; Gli-1 siRNA; Nanostructured lipid carrier; siRNA Bcl-2; siRNA EGFR; siRNA Gli-1; Skin cancer; Terapia gênica
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60137/tde-18052022-084302/

O câncer de pele avança a cada ano no que diz respeito ao número de casos em todo o mundo, principalmente em países onde há predominância de caucasianos. Os tratamentos disponíveis estão cada vez menos efetivos devido às inúmeras mutações e para superar tais desafios, as terapias de silenciamento gênico têm sido amplamente adotadas. No presente trabalho desenvolveu-se um carreador lipídico nanoestruturado (CLN) contendo 5-Fluororuracil e pool de siRNAs, (siRNA Gli-1, siRNA EGFR e siRNA Bcl-2) de modo a atuar em diferentes vias do câncer de pele. O CLN foi desenvolvido em homogeneizador de alta pressão e otimizado por planejamento experimental. Foi caracterizado e apresentou-se com diâmetro de partícula entre 200 e 250 nm, índice de polispersão menor que 0,3, potencial zeta de 49 mV, número de nanopartículas 1012/ mL. Foram realizados estudos iniciais de escalonamento de 20 mL até 200 mL, apresentando-se em todos os volumes as mesmas caractetísticas físico-quimicas. A complexação com os siRNAs ocorreu nas razões N/P 2 para os siRNAs controle e Bcl-2, e N/P 5 para siRNA Gli-1 e EGFR, e todos descomplexaram eficientemente com competição aniônica utilizando heparina. A liberação de 5-FU deu-se pela cinética de Higuchi, liberando cerca de 60 a 80% de 5-FU em 8 horas de forma sustentada. Estudos cutâneos in vitro e ex vivo indicaram que o 5-FU retem-se majoritariamente da epiderme. Além disso não causa danos teciduais e reduz a descamação do estrato córneo. Estudos celulares (2D e esferoides 3D) indicaram que o sistema em si é pouco tóxico, porém quando associado aos agentes ativos reduz significantemente a viabilidade celular. A linhagem celular A431 e A375 foram as linhagens mais suscetíveis à combinação CLN 5-FU + siRNA Bcl-2, as linhagens Sk-mel-103 e 1205Lu, tiveram sua viabilidade reduzida frente a combinação CLN 5-FU + pool, evidenciando serem mais agressivas e resistentes. O uptake celular ocorreu eficientemente nas linhagens e a via de internalização determinada foi endocitose dependente por clatrina e uma parte minoritária por caveolina. Determinou-se in vitro, que o CLN multifuncional contendo 5-FU + pool siRNA foi eficiente em conter a migração das linhagens bem como em conter a invasividade da linhagem 1205Lu. A combinação CLN 5-FU + siRNA Bcl-2, avaliada in vivo em modelo xenotransplante da linhagem A431, mostrou-capaz de suprimir o crescimento tumoral com infiltração inflamatória controlada (baixos índices de mieloperoxidase, N-acetilglucosaminidase e TNF-α). Além disso, sinalizando apoptose tumoral eficaz, knockdown de Bcl-2 e negatividade para remodelação da matriz extracelular.