Análise do potencial terapêutico de células derivadas do órgão vômeronasal de coelhos da raça Nova Zelândia

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Rodrigues, Marcio Nogueira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cavidade nasal; Cellular therapy; Células-tronco; Nasal cavity; Órgão vômeronasal; Stem Cells; Terapia celular; Vômeronasal organ
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-26012015-151912/

O órgão vômeronasal (OVN), é uma estrutura que detecta feromônios, emitindo sinais que modulam o comportamento social e reprodutivo. Possui células-tronco que se dividem e migram para substituir neurônios ao longo da vida. O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar as células derivadas do órgão vômeronasal de coelhos da raça Nova Zelândia e testar seu potencial terapêutico no tratamento da ablação da via vômeronasal. Utilizou-se 10 coelhos machos com 120 dias, sendo 9 submetidos a ablação do OVN e 1 utilizado para coleta de material para cultivo celular. Foram testados três meios de cultivo DMEM High Glucose, DMEM/F12 e MEM Alfa. No cultivo celular observou-se maior confluência e crescimento quando utilizado o DMEM High Glucose, confirmado pelos ensaios de MTT e Azul de Trypan. Na imunocitoquímica observou-se PCNA+, OCT4+, Nanog+, GFAP+, Vimentina+, Nestin+, Stro-1+, B-Tubulina+, CK-18+, CD73+, CD90+, CD105+, CD34-, CD117- e CD45-. Na citometria de fluxo foi observado PCNA+, OCT-3/4+, Nanog+, GFAP+, Vimentina+, Nestin+, Stro-1+, B-Tubulina+, CK-18+, CD73+, CD90+, CD105+, CD34- e CD45-. Na análise molecular foi possível observar a expressão de CD73, CD105, Oct-4, Nestina, Vimentina e GAPDH. Funcionalmente as células se diferenciaram em adipócitos, osteócitos e condrócitos e não possuem potencial tumorigênico em camundongos Balb-cnu/nu. A análise hormonal demonstrou que nos animais tratados após 7 e 14 dias não houveram diferenças significativas entre os grupos tratados e controles. No grupo após 21 dias notou-se uma diferença de 50% nos níveis hormonais no grupo tratado em relação ao grupo controle. Na análise da expressão para eGFP observou-se que os animais tratados após 7 dias as células injetadas formavam aglomerados celulares na região subjacente ao epitélio sensitivo. Após 14 dias continuavam a circundar o epitélio neurosensorial e após 21 dias observou-se pouca expressão de células localizadas apenas na região subjacente ao epitélio neurosensorial. A linhagem celular derivada do órgão vômeronasal possui uma população de células progenitoras, que foram visualizadas no foco da lesão, demonstrando sua capacidade de migração, o que a torna uma boa fonte para terapia celular em ablação da via vômeronasal.