Identificação da ligação direta de uma Fosfolipase D de Loxosceles gaucho às plaquetas.

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Fukuda, Daniel Akio
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Loxosceles gaucho; Aranhas; Binding; Chimeric toxin; Citometria de fluxo; EGFP; Flow cytometry; Fluorescent microscopy; Fosfolipase D; Green fluorecent protein; Ligação; Microscopia de fluorescência; Phospholipase D; Plaquetas; Platelets; Proteína verde fluorescente; Spiders; Toxina quimérica; Toxinas; Toxins
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-08022018-143046/

Fosfolipases D (FLD) do veneno das aranhas do gênero Loxosceles são capazes de causar entre outros efeitos, uma forte agregação plaquetária cujo mecanismo ainda não foi elucidado. Portanto, para estudar o papel das FLDs nesta atividade, uma FLD recombinante de L. gaucho (LgRec1) foi fusionada com a proteína fluorescente verde (EGFP) e utilizada como uma sonda para detectar a interação de LgRec1 com plaquetas. Essa quimera, denominada EGFP-LgRec1, manteve as principais características da LgRec1. A microscopia confocal das plaquetas mostrou que LgRec1 não requer componentes plasmáticos para se ligar às plaquetas, embora estes sejam necessários para que a LgRec1 induza agregação. Além disso, foi observado que a ação da LgRec1 leva à exposição de fosfatidilserina. Contudo, esta exposição não está relacionada à morte celular. Portanto, este trabalho mostrou que uma FLD de Loxosceles se liga a plaquetas, promovendo a exposição de fosfatidilserina, possibilitando a ligação de fatores de coagulação e resultando na agregação plaquetária.