O papel do HNF4 na morte das células beta pancreáticas induzida por citocinas pró-inflamatórias.

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Stefano, Angelo Gustavo Di
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cell death; Célula beta pancreática; Diabetes mellitus; Hepato-cyte nuclear factor 4 alpha; Hepatocyte nuclear factor 4 alpha; Morte celular; Pancreatic beta cell
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-16072020-154124/

O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune que causa a disfunção e a destruição das células &#946 pancreáticas, produtoras de insulina, ao induzir vias pró-apo-ptóticas, como o estresse de retículo endoplasmático (RE), devido a exposição dessas células à citocinas pró-inflamatórias. O Mature-onset diabetes of the youth type 1 (MODY1) é um tipo de DM causado por mutações no gene Hepatocyte nuclear factor 4 alpha (HNF4 &#945 ), levando a deficiência na secreção de insulina. Além de outras diversas funções na diferenciação e da sobrevivência das células &#946, esse gene também é importante para a manutenção da homeostase do RE, sugerindo que o papel do HNF4 &#945 na regulação da secreção de insulina poderia estar relacionado a viabilidade das células &#946 frente a exposição à citocinas pró-inflamatórias. Sendo assim, o estudo visou avaliar o papel desse gene na disfunção e morte de células &#946 após exposição destas às citocinas pró-inflamatórias. Foi realizado o silenciamento do HNF4 &#945 em células de insulinoma de rato (INS-1E) com siRNA seguido de tratamento com citocinas pró-inflamatórias (IL-1 &#946 + IFN- + TNF) ou tapsigargina (indutor de estresse de RE) para avaliação da ativação da Caspase-3 e das proteínas de estresse de RE (p-eIF2 &#945 , p-IRE1 e XBP1s) por western blot. Para avaliar o efeito do HNF4&#945 no metabolismo da glicose, foi realizado o Teste de Tolerância a Glicose (GTT) em camundongos da linhagem InsCRE.HNF4 &#945 loxP/loxP, após a indução do knockout. Em seguida, foi avaliado por western blot a expressão de Caspase-3 nas ilhotas dos camundongos knockout após exposição aos mesmos tratamentos que as células INS-1E. Também foi avaliada a expressão de insulina e glucagon nessas ilhotas através de imunohistoquímica. A redução da expressão do HNF4 &#945 protegeu contra morte por apoptose, pois diminui a expressão de Caspase-3 ativada nas células INS-1E e nas ilhotas knockout. Além disso, houve a redução da expressão das proteínas relacionadas ao estresse de RE nas células INS-1E. Animais HNF4 &#945 knockout apresentam tolerância diminuída a glicose. As ilhotas knockout apresentaram significativa redução na marcação de insulina. Como um todo, esses resultados mostram que o HNF4 &#945 parece ter uma participação 11 deletéria em células &#946 expostas à citocinas pró-inflamatórias, porém exerce um importante papel na função fisiológica dessas células. Frente a esses resultados, sugere-se um importante papel do HNF4 &#945 na manutenção do estado diferenciado das células &#946, pois, devido à perda desse estado diferenciado, pela redução da expressão desse fator de transcrição, essas células param de responder às citocinas pró-inflamatórias como esperado de uma célula &#946 normal. Sendo assim, um melhor entendimento das vias reguladas pelo HNF4 &#945 em células &#946 é de extrema importância para o desenvolvimento de terapias de prevenção da função e viabilidade dessas células.