Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: |
2020 |
Autor(a) principal: |
Stefano, Angelo Gustavo Di |
Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
Tipo de documento: |
Dissertação
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Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
Idioma: |
por |
Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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Departamento: |
Não Informado pela instituição
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País: |
Não Informado pela instituição
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Palavras-chave em Português: |
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Link de acesso: |
https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-16072020-154124/
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Resumo: |
O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune que causa a disfunção e a destruição das células β pancreáticas, produtoras de insulina, ao induzir vias pró-apo-ptóticas, como o estresse de retículo endoplasmático (RE), devido a exposição dessas células à citocinas pró-inflamatórias. O Mature-onset diabetes of the youth type 1 (MODY1) é um tipo de DM causado por mutações no gene Hepatocyte nuclear factor 4 alpha (HNF4 α ), levando a deficiência na secreção de insulina. Além de outras diversas funções na diferenciação e da sobrevivência das células β, esse gene também é importante para a manutenção da homeostase do RE, sugerindo que o papel do HNF4 α na regulação da secreção de insulina poderia estar relacionado a viabilidade das células β frente a exposição à citocinas pró-inflamatórias. Sendo assim, o estudo visou avaliar o papel desse gene na disfunção e morte de células β após exposição destas às citocinas pró-inflamatórias. Foi realizado o silenciamento do HNF4 α em células de insulinoma de rato (INS-1E) com siRNA seguido de tratamento com citocinas pró-inflamatórias (IL-1 β + IFN- + TNF) ou tapsigargina (indutor de estresse de RE) para avaliação da ativação da Caspase-3 e das proteínas de estresse de RE (p-eIF2 α , p-IRE1 e XBP1s) por western blot. Para avaliar o efeito do HNF4α no metabolismo da glicose, foi realizado o Teste de Tolerância a Glicose (GTT) em camundongos da linhagem InsCRE.HNF4 α loxP/loxP, após a indução do knockout. Em seguida, foi avaliado por western blot a expressão de Caspase-3 nas ilhotas dos camundongos knockout após exposição aos mesmos tratamentos que as células INS-1E. Também foi avaliada a expressão de insulina e glucagon nessas ilhotas através de imunohistoquímica. A redução da expressão do HNF4 α protegeu contra morte por apoptose, pois diminui a expressão de Caspase-3 ativada nas células INS-1E e nas ilhotas knockout. Além disso, houve a redução da expressão das proteínas relacionadas ao estresse de RE nas células INS-1E. Animais HNF4 α knockout apresentam tolerância diminuída a glicose. As ilhotas knockout apresentaram significativa redução na marcação de insulina. Como um todo, esses resultados mostram que o HNF4 α parece ter uma participação 11 deletéria em células β expostas à citocinas pró-inflamatórias, porém exerce um importante papel na função fisiológica dessas células. Frente a esses resultados, sugere-se um importante papel do HNF4 α na manutenção do estado diferenciado das células β, pois, devido à perda desse estado diferenciado, pela redução da expressão desse fator de transcrição, essas células param de responder às citocinas pró-inflamatórias como esperado de uma célula β normal. Sendo assim, um melhor entendimento das vias reguladas pelo HNF4 α em células β é de extrema importância para o desenvolvimento de terapias de prevenção da função e viabilidade dessas células. |