Desafio de laranjeiras doces geneticamente modificadas à infecção por Candidatus Liberibacter asiaticus e Xanthomonas citri subsp. citri

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Docema, Matheus Luís
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Citrus sinensis; Bacteria; Bactérias; Disease resistance; Genetic transformation; Resistência a doenças; Transformação genética
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11136/tde-27052021-180148/

O Brasil é o maior produtor mundial de laranja doce, assim como o maior exportador de suco concentrado. Entretanto, o setor citrícola apresenta algumas dificuldades no processo produtivo atribuídas, principalmente, a problemas fitossanitários, com ênfase para doenças bacterianas, a exemplo do huanglongbing (HLB) e do cancro cítrico. O HLB é considerado uma das doenças mais destrutivas que a citricultura já enfrentou, sendo agravada pela ausência de medidas curativas e de cultivares de citros resistentes. Da mesma forma, o cancro cítrico é uma importante doença, a qual tem registrado um aumento considerável de sua incidência nos pomares cítricos nos anos recentes. Nesse cenário, a produção de plantas transgênicas pode ser uma solução eficaz na busca de cultivares resistentes com o uso de diversas estratégias, tais como a expressão de genes que codificam peptídeos antimicrobianos e de genes diferencialmente expressos em plantas resistentes inoculadas com diferentes patógenos. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a reação de plantas de laranja \'Hamlin\' (Citrus sinensis L. Osbeck) transformadas com o gene que codifica o peptídeo antimicrobiano e sintético d4el, dirigido pelo promotor 35S e plantas de laranja \'Hamlin\' transformadas com o gene que codifica a superóxido dismutase do cobre e do zinco (csdl), isolado de Poncirus trifoliata e dirigido pelo promotor Ubiquitina 10, desafiando-as contra Candidatus Liberibacter asiaticus e Xanthomonas citri subsp. citri. As plantas de laranja \'Hamlin\' foram propagadas, por enxertia, em porta-enxertos de limão \'Cravo\' (Citrus limonia Osbeck), e então inoculadas com borbulhões infectados com CLas, ou inoculadas, por aspersão e por ferimentos, com suspensão de Xcc. A presença e concentração de CLas foram determinadas nos tecidos foliares, por qPCR, seis, 12 e 18 meses após a inoculação (m.a.i.). O acúmulo de peróxido de hidrogênio, as atividades de enzimas antioxidantes e a detecção de calose foram avaliadas em eventos transgênicos de laranjeira doce após as inoculações dos patógenos. Cinco eventos transgênicos que expressam o gene csdl e outro, expressando o gene d4el, exibiram populações reduzidas de CLas quando comparados com plantas não transgênicas, e não mostraram sintomas visíveis de HLB, seis m.a.i. de CLas. A incidência e severidade de cancro cítrico foram reduzidas em alguns eventos transgênicos, exibindo populações de Xcc significativamente inferiores quando comparadas com plantas não transgênicas. Os eventos transgênicos que registraram maiores atividades isoenzimáticas de SOD também exibiram maiores acúmulos de peróxido de hidrogênio nos tecidos foliares, após a inoculação com Xcc. A análise de epifluorescência mostrou alta deposição de calose nos elementos de tubo crivado nos tecidos foliares de alguns eventos transgênicos. Esses resultados sugerem que a formação da calose pode ser uma importante resposta de defesa aos estresses bióticos, resultando em menores populações de CLas e Xcc.