Avaliação do efeito de diferentes tempos de ventilação na vasculatura pulmonar e na expressão de VEGF, VEGFR-1/2 e eNOS em neonatos de ratos com hérnia diafragmática congênita

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Costa, Karina Miura da
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Congenital diaphragmatic hernia; eNOS; Hérnia diafragmática congênita; Mechanical ventilation; Nitrofen; VEGF; VEGFR-1; VEGFR-2; Ventilação mecânica
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17137/tde-08022021-145538/

Introdução: A hérnia diafragmática congênita (HDC) consiste em um defeito na formação do diafragma que resulta na passagem de vísceras abdominais para a cavidade torácica. A incidência é de 1:2500-4000 nascidos vivos e sua elevada morbimortalidade está relacionada à hipoplasia e à hipertensão arterial pulmonar, cujos mecanismos ainda são pouco compreendidos e tornam o cuidado neonatal um grande desafio. Portadores de HDC apresentam um curto período de estabilidade ventilatória pós-natal, com oxigenação sistêmica adequada, chamado de período de lua de mel (honeymoon). Em seguida, há deterioração progressiva da oxigenação com piora da hipertensão pulmonar. Acredita-se que alterações da sinalização mediadas pelo VEGF, VEGFR-1/2 e pela eNOS levam à adaptação errática da circulação pulmonar neonatal e resultam em alterações da reatividade vascular, com consequente hipertensão pulmonar. Objetivo: Avaliar o efeito da ventilação mecânica durante o período de lua de mel na morfometria e na expressão de VEGF, VEGFR-1/2 e eNOS na HDC experimental em ratos. Material e Métodos: Filhotes de ratas Sprague Dawley foram separados em cinco grupos: controle (C), controle respirando (CR), controle ventilado (CV), hérnia diafragmática congênita (HDC) e hérnia diafragmática congênita ventilado (HDCV). Para os grupos com HDC, as ratas prenhes foram expostas a 100 mg de nitrofen no dia gestacional (DG) 9,5. Os grupos CR, CV e HDCV foram subdivididos em tempos ventilatórios de 30, 60 e 90 minutos (n=7-8 cada). No DG 21,5, os neonatos foram coletados e, após a ventilação (grupos ventilados) e a pesagem (grupos não ventilados), foram sacrificados. Os pulmões de n=4 neonatos de cada grupo foram submetidos à análise do parênquima (fração de espaço aéreo) e da vasculatura pulmonar (espessura da camada média), além da avaliação imuno-histoquímica (IHQ) (n=4) e por western blotting (WB) (n=3-4) da expressão de VEGF, VEGFR-1/2 e eNOS. A análise estatística foi realizada com diferenças significativas para p<0,05 usando ANOVA one-way com pós-teste de Tukey. Resultados: Os grupos com HDC apresentaram menores parâmetros biométricos que os grupos controle. A fração de espaço aéreo do grupo HDC foi menor do que todos os demais grupos, e os grupos ventilados apresentaram valores semelhantes independente do tempo ventilatório. Quanto à vasculatura pulmonar, os controles apresentaram redução da espessura da camada média, enquanto os neonatos com HDC tiveram aumento desse parâmetro com a progressão do tempo ventilatório (período de lua de mel). Os grupos controle e os grupos com HDC apresentaram diferentes padrões de expressão de VEGF, VEGFR-1/2 e eNOS. Os achados de expressão dos receptores e eNOS foram significativos à IHQ mas não ao WB, enquanto o VEGF foi significativo ao WB mas não à IHQ. Conclusão: Houve alteração da reatividade vascular pulmonar e da expressão de VEGF, VEGFR-1/2 e eNOS na HDC em ratos durante o período de lua de mel, o que sugere um papel importante da via VEGF-NO nesse período.