Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: |
2024 |
Autor(a) principal: |
Lima Neto, Sergio Pereira |
Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
Tipo de documento: |
Dissertação
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Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
Idioma: |
por |
Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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Departamento: |
Não Informado pela instituição
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País: |
Não Informado pela instituição
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Palavras-chave em Português: |
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Link de acesso: |
https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-19022025-091723/
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Resumo: |
O zinco é um micronutriente essencial para a manutenção da vida por atuar como cofator enzimático, desempenhando funções estruturais, catalíticas e regulatórias em proteínas. Entretanto, em excesso o zinco é tóxico para as células por causar a metalação incorreta de proteínas. A homeostase do zinco em bactérias envolve a regulação de diversos genes pelo fator de transcrição Zur. No patógeno ambiental Chromobacterium violaceum a captação de zinco é importante para virulência. Entretanto, pouco é conhecido sobre os genes regulados por Zur nesta bactéria. Neste trabalho, investigamos o regulon Zur de C. violaceum de modo global e caracterizamos com detalhes um gene regulado por Zur que codifica a proteína hipotética CV_RS15040. Usando sequenciamento de RNA (RNA-seq) das linhagens selvagem e Δzur e validação por RT-qPCR, foram identificados 23 genes diferencialmente expressos, sendo 9 genes com expressão aumentada e 14 genes com expressão diminuída no mutante Δzur. Os genes com aumentada expressão em Δzur incluem o operon zur com genes relacionados a captação de zinco (CV_RS15045, CV_RS15040, znuCBA) e zntA que codifica uma ATPase do tipo P de efluxo de zinco. Ensaios de EMSA indicaram a ligação direta de Zur de modo dependente de zinco ao promotor do operon zur, mas não ao promotor de zntA. Análises in silico revelaram que a pequena proteína CV_RS15040 de 63 aminoácidos possui uma região N-terminal desordenada rica em histidinas com potencial de ligar zinco e uma região transmembrana C-terminal. Uma linhagem mutante ΔCV_RS15040 obtida neste trabalho apresentou crescimento prejudicado em limitação de zinco, redução do conteúdo celular de zinco, aumento da expressão dos genes do operon zur e drástica redução de virulência em camundongos. Mutantes ΔznuA e ΔCV_RS15040znuA testados para algumas destas condições, apresentaram fenótipos similares ao mutante ΔCV_RS15040, sugerindo que CV_RS15040 deve atuar com o sistema ZnuABC na captação de zinco. Em resumo, este estudo demonstrou que Zur regula poucos genes em C. violaceum, incluindo a pequena proteína CV_RS15040 que é fundamental para homeostase do zinco e virulência desta bactéria. |