Proteases de Panagrolaimus sp. CEW2 (Nematoda, Rhabditida).

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Coelho, Camila Cristina
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Panagrolaimus; extremófilo; extremophile; nematode; nematoide; protease
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-01082022-100116/

Nematoides de vida livre do gênero Panagrolaimus se caracterizam por apresentar hábitos extremófilos, sobrevivendo a condições de baixa temperatura e baixa umidade relativa. A linhagem dióica que utilizamos em nossos estudos (Panagrolaimus sp. CEW2) foi isolada em Rondônia e tem se mostrado resistente a dessecação, congelamento e alta força iônica/pressão osmótica. Proteases têm sido estudadas do ponto de vista bioquímico principalmente em nematoides parasitas. Apesar de 2% dos genes de C. elegans serem anotados como protease pouco se sabe sobre suas proteases digestivas. Os ensaios de atividade encontrados no extrato total de CEW2 foram realizados utilizando substratos sintéticos para tripsina, quimotripsina, aminopeptidase, elastases e catepsina. Desenvolvemos um método de crescimento em massa de Panagrolaimus sp. CEW2 utilizando meio S, E. coli linhagem NA22 e um substrato sólido feito com esponja de poliuretano. Este método aumentou em 3x a quantidade de nematoides obtidos quando comparados ao crescimento em placa de Petri com meio NGM. As atividades enzimáticas detectadas foram caracterizadas em relação ao seu pH ótimo, temperatura ótima e sensibilidade a íons metálicos e inibidores. Uma atividade elastásica detectada no homogeneizado de vermes era dependente de cálcio e inesperadamente ativada por sulfato de cobre. Atividades tipo tripsina e quimotripsina não foram detectadas nos homogeneizados.