Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2018 |
| Autor(a) principal: |
Arias, Adriana Rocio Cardenas |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-08122021-104616/
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Resumo: |
A leptospirose é causada por espécies patogênicas da espiroqueta Leptospira. É uma das zoonoses mais disseminadas em todo o mundo, representando um grande problema de saúde pública em países tropicais subdesenvolvidos. No processo de infecção, leptospiras patogênicas, quando presentes em grande número, são capazes de sobreviver, se multiplicar e desencadear uma resposta imune específica. Isto se deve à capacidade que apresentam de aderir a células eucariotas e a proteínas da matriz extracelular e à habilidade de escapar aos mecanismos de defesa inata do hospedeiro. O principal objetivo deste trabalho foi identificar proteínas de membrana externa de Leptospira capazes de interagir com moléculas do hospedeiro. Proteínas de membrana externa (OMPs) da bactéria foram obtidas e incubadas com proteínas da matriz extracelular, da cascata de coagulação e com o regulador negativo do sistema complemento Fator H, pré-imobilizados em esferas magnéticas. Os ligantes foram identificados por espectrometria de massas. Uma série de proteínas foi identificada, algumas já descritas como supostas adesinas e outras com função ainda desconhecida. Do total de proteínas obtidas, cinco (LIC20001, LIC11003 ou LruA /LipL71, LIC12966 ou LipL41, LIC12901 e LIC13322) foram selecionadas e produzidas em sistema heterólogo em Escherichia coli. A seleção dessas proteínas baseou-se na presença de domínios relacionados à adesão e na ocorrência apenas em espécies patogênicas de Leptospira. A interação com componentes específicos do hospedeiro foi validada por ensaios de Far - Western blot. À exceção da LipL41, todas as demais proteínas tiveram suas interações confirmadas por esta técnica. Duas das cinco proteínas (LIC20001 e LIC13322) foram melhor caracterizadas, e os dados mostraram que o domínio discoidina da LIC20001 é o responsável pela interação com fibrinogênio, fibronectina, laminina e vários tipos de colágeno. A localização na superfície da 12 bactéria foi experimentalmente confirmada por microscopia eletrônica e a proteína foi capaz de inibir, ainda que marginalmente, a interação da bactéria a alguns dos componentes testados. A outra proteína, LIC13322, é uma metaloprotease que vem sendo estudada pelo grupo, capaz de se ligar e clivar moléculas da cascata do complemento. Neste trabalho, demonstrou-se que LIC13322 liga-se à vitronectina, nos domínios de interação com heparina e, aparentemente, forças iônicas estão envolvidas nesta interação. A caracterização funcional destas proteínas, assim como a identificação das moléculas-alvo do hospedeiro com as quais essas proteínas são capazes de interagir, podem contribuir para a compreensão dos mecanismos de invasão, disseminação e evasão imune utilizados por leptospiras patogênicas. |
