Caracterização de um novo RNA longo não codificador e seu provável papel no desenvolvimento neuronal

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Barros, Isabela Ichihara de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs); Deficiência intelectual; Diferenciação neural; Induced pluripotent stem cells (iPSCs); Intellectual disability; Long noncoding RNA (lncRNA); Neural differentiation; Neurodesenvolvimento; Neurodevelopment; RNA longo não codificador (lncRNA)
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-11062021-080115/

Componentes de um grupo altamente heterogêneo de RNAs, os RNAs longos não codificadores (lncRNAs) têm sido descritos nos mais variados processos biológicos e sua importância no contexto regulatório celular tem sido cada vez mais reconhecido. Apesar de uma grande parcela de transcritos ainda não possuir caracterização funcional, diversos lncRNAs vêm sendo descritos como atores fundamentais em vias do desenvolvimento embrionário e, mais especificamente, do neurodesenvolvimento. O lncRNA RP11-1082A3.1 é um transcrito testículo-específico que ainda não possui nenhuma função conhecida e cujo locus foi perdido em um paciente atendido pelo serviço de Genética Médica da Faculdade de Medicina da USP de Ribeirão Preto. Este paciente apresenta dentre os seus fenótipos deficiência intelectual (DI), macrocefalia, dificuldade motora e de aprendizado, porém sem diagnóstico específico. Foi identificada uma microdeleção na região 14q32.2 no paciente e, como não há nenhum outro gene conhecido na região deletada, apenas o lncRNA, hipotetizamos que esse transcrito pode estar envolvido com o desenvolvimento neuronal e a sua perda pode ter influenciado no quadro de DI do paciente. O objetivo deste trabalho foi, então, investigar se o lncRNA RP11-1082A3.1 está envolvido no processo de diferenciação celular do sistema nervoso central. A expressão testículo-específica do transcrito foi validada e ele também foi encontrado expresso em linhagens celulares de câncer, o que pode indicar sua atuação durante a embriogênese. Além disso, com análises in silico, foram encontrados diversos RNAs potenciais parceiros de interação que atuam em vias importantes para o neurodesenvolvimento e correto funcionamento neuronal, indicando que o lncRNA também pode estar atuando nesses processos. Foram geradas células pluripotentes induzidas (iPSCs) do paciente com a microdeleção e foi verificado um atraso na diferenciação neuronal, quando comparados com iPSCs de um indivíduo controle, o que foi identificado tanto fenotipicamente quanto por marcadores de progenitores neurais. Adicionalmente, em uma linhagem de iPSCs, foi observado que a diminuição da expressão do RP11-1082A3.1 levou à diminuição da expressão de marcadores neurais após diferenciação. Além disso, a superexpressão desse lncRNA diminuiu a capacidade proliferativa das iPSCs do paciente em 168h, indicando seu papel regulatório nesse processo. Tais resultados indicam que o RP11-1082A3.1 pode estar atuando na diferenciação neuronal, sendo potencialmente importante para que as células passem de um estado proliferativo para um estado de diferenciação.