Estudo comparativo entre a eficiência de co-transfecção e transfecção de vetores portadores do gene da glicoproteína do vírus rábico (GPV) em células de Drosophila melanogaster S2.

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Santos, Alexandra Souza dos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Drosophila melanogaster; Biologia molecular; Biotechnology; Biotecnologia; Cells; Células; Expressão gênica; Gene expression; Insects; Insetos; Molecular biology; Transfecção; Transfection
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-04082009-113900/

Dentre as vantagens do sistema de expressão gênica em células de drosófila observa-se ainda o estabelecimento rápido de linhagens estáveis de células que secretam de forma eficiente a proteína recombinante. Temos estabelecidas populações de células co-transfectadas S2AcGPV e transfectadas S2AcGPVHy. O objetivo deste trabalho é a comparação da expressão de GPV em células S2 co-transfectadas com os vetores pAcGPV (vetor de expressão) e o pCoHygro (vetor de seleção) ou transfectadas com um único vetor pAcGPVHygro (contendo o vetor de expressão e seleção). As populações obtidas foram analisadas em relação à expressão de GPV em imunoensaios: teste ELISA, Dot Blot, géis de SDS-PAGE, Western Blot, citometria de fluxo (FACS) e microscopia confocal. Os ensaios de imunofluorescência em citometria fluxo (FACS) realizados demonstraram que as células transfectadas e co-transfectadas estão expressando a proteína GPV. Valores entre 0,3 e 4 mg/107 células foram obtidos. Além disso, anticorpos anti-GPV foram capazes de reconhecer a proteína GPV .