Avaliação funcional de vesículas extracelulares na infecção pelo vírus T-linfotrópico humano 1 (HTLV-1)

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: La-Roque, Debora Glenda Lima de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Deltaretrovirus; Doenças negligenciadas; HBZ; Neglected diseases; Retroviroses; Retrovirus; Retrovírus; Tax
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-22032022-102658/

O vírus T-linfotrópico humano 1 (HTLV-1) é o agente etiológico da leucemia/linfoma de células T do adulto (ATL) e da paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTLV-1 (HAM/TSP). O mecanismo que leva a estas manifestações clínicas tão distintas ainda não está elucidado. No entanto, sabe-se que os genes virais tax e HTLV-1 basic leucine zipper factor (HBZ) estão relacionados à infectividade viral e ao desenvolvimento de complicações neurológicas e hematológicas. Atualmente, existem evidências de que as células infectadas pelo HTLV-1 podem liberar vesículas extracelulares (VE) que participam da disseminação de partículas virais. Visando auxiliar a compreensão da patogênese do HTLV-1, este trabalho avaliou os níveis de expressão de tax e HBZ em VE provenientes do soro de indivíduos infectados, bem como o papel destas na modulação da resposta imune. As VE foram isoladas por precipitação polimérica e caracterizadas quanto ao diâmetro, a presença dos marcadores proteicos Alix, GAPDH e CD9 e ausência da proteína viral p19. A análise da expressão dos genes tax e HBZ foi realizada por PCR quantitativa e comparada à carga proviral (CPV) em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) dos portadores assintomáticos e sintomáticos para a HAM/TSP. Os níveis de transcritos dos genes tax e HBZ em VE foram correlacionados positivamente à CPV dos indivíduos HAM/TSP. Apenas os indivíduos com CPV acima de 6 mil cópias para cada 10^5 PBMC apresentaram transcritos virais em VE. Ademais, observou-se que, quando em níveis detectáveis, as unidades relativas de expressão (URE) de HBZ foram de 2 a 12 vezes maiores que as de tax. A seguir, a expressão e secreção de citocinas inflamatórias foi avaliada em PBMC de indivíduos saudáveis e de portadores do HTLV-1, expostas a crescentes doses de VE tax+ e HBZ+. A análise da expressão gênica por PCR quantitativa indicou aumento de transcritos da interleucina 8 (IL-8) em PBMC infectada de CPV baixa decorrentes do tratamento com VE infectadas. Este aumento também foi observado a nível proteico, confirmado pelo ensaio multiplex customizado MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel (Millipore), que avaliou a presença de citocinas inflamatórias no sobrenadante de cultivo. Interessantemente, o aumento de IL-8 chegou a níveis próximos ao observado em PBMC de CPV elevada. Estes achados indicam que a expressão de transcritos virais em VE derivadas do soro de portadores do HTLV-1 está relacionada à CPV apresentada pelo indivíduo. Adicionalmente, VE tax+ e HBZ+ podem induzir a produção de citocinas inflamatórias em pacientes de CPV reduzida, o que pode estar relacionado ao desenvolvimento de sintomas na infecção pelo HTLV-1.