Proteína prion como um regulador de stemness em células-tronco de glioblastoma: seu papel na formação e função de plataformas multiprotéicas de sinalização

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Prado, Mariana Brandão
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cellular prion Protein; Células-tronco de glioblastoma; Glioblastoma; Glioblastoma stem cells; Invasão; Invasion; Migração; Migration; Proteina prion celular
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-24082023-144800/

O glioblastoma multiforme (GB) é um tumor composto por células da glia, sendo o tipo de glioma mais comum e maligno, com altas taxas de recorrência e mortalidade. Adicionalmente, certos aspectos do GB dificultam a sua remoção cirúrgica completa, como o fato de crescer em regiões do cérebro de difícil acesso e seu padrão de crescimento difuso, sem bordas definidas. Estudos têm demonstrado que o GB é mantido por uma subpopulação semelhante a células-tronco denominadas células-tronco de glioblastoma (CTGs). Essas células se autorrenovam, promovem a angiogênese e a invasão e também são quimio e radiorresistentes. Assim, CTGs têm potencial significativo como um alvo terapêutico para o tratamento de glioblastomas. Estudos recentes têm mostrado que a proteína prion celular (PrPC) surge como um fator chave na manutenção do GB e CTGs. A PrPC tem um papel importante como uma scaffold protein sendo capaz de interagir com várias outras proteínas de membrana e matriz extracelular, formando complexos capazes de regular diferentes funções da biologia tumoral. Nesse estudo geramos células U87 e U251 nocautes (KO) para PrPC através do método CRISPR-Cas9, que são cultivadas em duas condições distintas, a de monocamada (2D), e a de neuroesfera (3D), a qual é enriquecida com marcadores de CTGs. Nossos estudos indicam que PrPC é capaz de regular a expressão e localização de CD44, assim como a expressão de EGFR em células U87. Ademais, ensaios de citometria de fluxo demostram que outras proteínas de membrana, como NOTCH1, integrina 6 e CD133, apresentam redução da expressão na superfície celular de células KO quando comparamos com células WT. Dados de transcriptoma de células KO aqui descritos reforçam o papel de PrPC na modulação da biologia do GB, sendo capaz de modular genes relacionados a proliferação, stemness e migração celular. De fato, ensaios funcionais corroboram esses dados, demonstrando que a perda de PrPC leva a uma diminuição na proliferação, autorrenovação e migração em GB. Sendo assim, os resultados aqui descritos reforçam o papel de PrPC como uma proteína-chave na manutenção do GB e CTGs, e com um potencial terapêutico.