Estudo dos domínios funcionais da  proteína de matriz do vírus respiratório sincicial humano.

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Tamura, Rodrigo Esaki
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Cell nucleus; Citoeskeleton; Citoesqueleto; Membrana plasmática; Núcleo celular; Plasma membrane; Proteínas recombinantes; Recombinant proteins; RNA virus; Vaccines; Vacinas; Vírus de RNA
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-28042009-123838/

A proteína de matriz do Virus Respiratório Sincicial humano foi o foco deste trabalho. Verificamos que o gene de matriz possui sítios internos de poliadenilação, sinais de instabilidade de RNA, baixo índice de adaptação de codons (CAI) e conteúdo GC, que podem impedir a expressão gênica vitro. Quando clonado sob controle do promotor de CMVie, o gene selvagem não apresenta expressão detectável, enquanto um gene sintético com a sequência do gene de matriz otimizada apresenta altos níveis de expressão em células transfectadas. Esse alto nível de expressão permitiu a confirmação da presença da proteína M no núcleo no início de sua expressão, por análise em microscopio confocal de varredura a laser, além de sua associação a membranas em regiões conhecidas como lipid rafts. Também foi observado que a proteína M é capaz de associar à proteína tropomiosina. Ainda foram analisados os possíveis domínios funcionais através de expressão de variantes da proteína M com deleções de trechos da proteína. Finalmente foi analisada a capacidade de indução de resposta imune.