Efeito dos desacopladores de membrana mitocondrial (CCCP, DNP e FCCP) na função espermática bovina

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Fusada, Eric Jun Yonamine
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Atributos espermáticos; CASA; Citometria de fluxo; EROs; Espermatozoide; Fertilidade masculina; Flow cytometry; Male fertility; ROS; Sperm
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-16082022-115456/

A variável touro tem apresentado um efeito significativo nas taxas de blastocisto podendo variar entre 6,9 e 51,2%. A elucidação dos fatores responsáveis por essas diferenças de desempenho entre touros tem impulsionado diversas linhas de pesquisas dentro da produção in vitro de embriões (PIVE). O estresse oxidativo é descrito como um dos fatores que podem levar a estas baixas taxas no sistema in vitro, causado por uma elevada produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Neste estudo a hipótese testada foi de que o tratamento com desacopladores de membrana mitocondrial reduz a produção mitocondrial de EROs, porém mantém a viabilidade espermática. Os objetivos foram comparar diferentes desacopladores de membrana mitocondrial, em relação à dose e o efeito do tempo de exposição sobre os atributos espermáticos. Para tanto foram realizados tratamentos com diferentes desacopladores [Carbonil Cianeto M-Clorafenilhidrazona (CCCP), 2,4-Dinitrofenol (DNP) e Carbonil Cianeto 4-(Trifluorometoxi) Fenilhidrazona (FCCP)] no sêmen descongelado de bovinos. Os resultados demonstraram que o DNP, dentre os testados, é um desacoplador fraco. A citometria de fluxo evidenciou que o FCCP e CCCP apresentaram redução significativa (p=0,0019, p<0,001, respectivamente) de células espermáticas manifestando marcação negativa para o estresse oxidativo celular e membrana plasmática íntegra. Já a análise computadorizada (CASA) revelou acentuada queda de motilidade com a utilização dos desacopladores CCCP e FCCP, provavelmente pela supressão da produção de ATP através da ATP sintase. O estudo em questão, demonstrou que a motilidade é o atributo mais sensível para o espermatozoide quando submetido ao tratamento com os referidos desacopladores e sugere a suplementação com glicose para promover a estimulação da via glicolítica e assim manter a viabilidade e motilidade destas células. O sêmen quando tratado antes do gradiente de Percoll®, mantém a motilidade constante devido a alguma influência não diagnosticada, mesmo quando suplementada com glicose (5 µM).