Interação de células epiteliais alveolares do tipo II e células dendríticas na infecção com Mycobacterium tuberculosis: o papel do HIF-1?

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Rodrigues, Tamara Silva
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: AEC-II; BMDCs; HIF-1?; Mtb
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-30052019-165552/

A tuberculose (Tb) é uma doença infecciosa crônica ocasionada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb). No espaço alveolar, o bacilo entra em contato com células do sistema imune inato como as células dendríticas (DCs), assim como células epiteliais (AEC). Na Tb, o fator de transcrição HIF-1? (Fator Induzido por Hipóxia 1 alfa) se encontra elevado em macrófagos infectados e células epiteliais alveolares adjacentes. Por isso, o objetivo deste trabalho foi investigar o papel de HIF-1? na resposta pró- inflamatória de AEC do tipo II (AEC-II) e na modulação da função de DCs em contato com AEC-II durante a infecção por Mtb. Células MLE-15 foram infectadas com Mtb H37Rv (MOI10) para avaliação da permissividade à infecção (microscopia eletrônica), crescimento dos bacilos (CFU) e ativação através da análise de citocinas (ELISA), nitrito (ensaio de Griess), TLR2, TLR9 e HIF-1? (qPCR e/ou Western blotting). A modulação DCs derivadas da medula óssea (BMDCs) por AEC-II, foi analisada de forma direta (contato) ou indireta (meio condicionado - CM) de MLE-15 não infectadas (CM - NIC) ou infectadas (CM - IC). Foram determinadas citocinas (ELISA), nitrito (Ensaio de Griess), expressão de HIF-1?, enzimas glicolíticas, moléculas co-estimuladoras e CCR7 (citometria de fluxo). Ensaio de migração foi realizando em câmera de boyden. A proliferação de células T CD4+ naive em co-cultura com BMDCs e a manutenção da Th17 foram avaliadas por citometria de fluxo. Eventualmente, BMDCs foram previamente infectadas com Mtb (MOI2) e, em seguida, estimuladas com CM-NIC ou CM-IC. Células MLE-15 mostraram-se permissivas à infecção, não conseguindo controlar o crescimento dos bacilos. A infecção induziu aumento da produção de IL-6, NO2-,CCL5, S100A9 e IFN- ?. Apesar do acúmulo inicial de HIF-1?, a expressão gênica caiu com o passar do tempo. A expressão gênica de TLR2 e TLR9 também estava aumentada. A regulação positiva10 de HIF-1? em células epiteliais induziu uma redução de IL-6 e NO, sem, no entanto, interferir significativamente no número de CFU. BMDCs estimuladas com CM - IC mostraram maior produção de IL-1?, IL-12, IL-6 e IL-10, maior expressão gênica de GLUT1 e HK2, além do acúmulo inicial de HIF-1?, que foi degradado em 24 horas, acompanhado de baixa expressão de iNOS. A expressão MHC-II, CD80, CD86 e CCR7 estava aumentada em BMDCs submetidas ao CM - IC, enquanto a indução do acúmulo de HIF-1? através do seu estabilizador, DMOG, foi capaz de reverter negativamente essa resposta. A maior maturação de BMDCs ocasionou maior proliferação de células TCD4+ naive, desfavorecendo a indução de células T CD4+ IFN?+. Entretanto, as citocinas produzidas favorecerem a manutenção de células TCD4+ produtoras de IL-17. No entanto, o fenótipo de maior maturação foi perdido em BMDCs infectadas estimuladas com CM - IC, aliado à baixa produção de TNF e alta produção de IL-10. Em conclusão, HIF-1? mostrou uma função anti-inflamatória, reduzindo a produção de moléculas pró- inflamatórias por AEC-II e regulando negativamente a maturação e a migração de DCs. Além disso, apesar de AEC-II infectadas por Mtb favorecerem a maturação e migração de DCs, o Mtb é capaz de subverter essa resposta