Análise funcional de genes regulados por glicocoeticóides na reversão fenotípica tumoral-normal de células ST1 de glioma de rato

• Ano de defesa: 2001
• Autor(a) principal: Flatschart, Roberto Becht
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Biologia celular; Biologia molecular; Células (Estudo); Citopatologia
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-20032024-175737/

As linhagens celulares ST1 e P7 (ARMELIN e ARMELIN, 1983), isoladas no laboratório a partir da linhagem C6 de glioma de rato, constituem modelos interessantes para o estudo da ação de glicocorticóides por mostrarem, respectivamente, hiperesponsividade e resistência ao tratamento com o hormônio quando observados morfologia, tempo de dobramento, densidade de saturação, crescimento em suspensão de agarose e tumorigenicidade em camundongos \"nude\". Em trabalhos anteriores, foram isoladas de bibliotecas de cDNA de células ST1, através de hibridização diferencial, seqüências correspondentes a metalotioneína 1, metalotioneína 2, glicoproteína α-1 ácida e pelo menos um transcrito de um retrovírus endógeno (clones C27, C36, C4 l e CV2, respectivamente) (VALENTINI e ARMELIN, 1996). Para comprovar o envolvimento das proteínas Metalotioneína 1, Metalotioneína 2, Glicoproteína α-1-ácida e env na reversão fenotípica observada nas células ST1 tratadas com hidrocortisona, duas abordagens diferentes foram usadas: a inibição da expressão dessas proteínas com oligonucleotídeos ou construções \"antisense\" e a super-expressão dessas proteínas usando vetores de expressão induzíveis. Nos ensaios de crescimento em suspensão de agarose, levados a cabo com populações de células transfectadas com construções induzíveis contendo os cDNAs de interesse nas orientações \"sense\" ou \"antisense\", o padrão de crescimento das células transfectadas, na ausência ou na presença de hidrocortisona e/ou indutor permitiu confirmar o possível papel das proteínas correspondentes na reversão fenotípica induzida por hidrocortisona. Os resultados mostraram que transcritos \"antisense\" de glicoproteína α-1-ácida, metalotioneína 2, metalotioneína 1 e env foram capazes de inibir, em maior ou menor grau, o efeito de hidrocortisona em células ST1 transfectadas. Por outro lado, a indução da expressão de Metalotioneína 1 e env foram capazes de inibir, parcialmente, a formação de colônias em células ST1 e P7 transfectadas com construções \"sense\".