Uso da técnica SERS para imageamento de complexos de cobre (II) em células HeLa e para caracterização do complexo de superfície da 5-nitroisatina em prata

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Marin, Jayr Henrique
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Células HeLa; Complexos oxindolimínicos; HeLa cells; Oxindoliminic complexes; Raman ressonante; Resonant Raman; SERS
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-20082019-155240/

A capacidade de complexos oxindolimínicos de cobre (II) de inibir células cancerígenas HeLa foi determinada no Laboratório de Bioinorgânica, Catálise e Farmacologia (IQ-USP), coordenado pela Profa. Dra. Ana Maria da Costa Ferreira. Nesta dissertação um dos estudos foi obter o imageamento SERS desses compostos no interior de células HeLa vivas com o objetivo de identificar o alvo intracelular desses complexos. Devido a intensificação SERS desses complexos ser baixa e causarem a agregação das nanopartículas de ouro (AuNP) foi necessária a utilização de um marcador Raman (MR) nestes estudos, sendo escolhido o composto DTNB (Ácido 5,5\'-ditiobis-(2-nitrobenzóico)). Portanto a sonda SERS desse estudo consiste de AuNP esféricas juntamente com o MR e os complexos de cobre (AuNP/MR/Cu(isatp) ou Cu(nisatp)). No imageamento das células HeLa foram utilizadas duas radiações excitantes: 532 nm, onde não ocorre intensificação SERS originando uma imagem Raman dos constituintes celulares em maior quantidade e 785 nm, que possibilita o monitoramento dos sistemas AuNP/MR/Cu(isatp) ou Cu(nisatp) no interior das células. Para a análise dos espectros desse estudo (cerca de 2000 espectros para cada imageamento) a linha base foi corrigida por WLS (Weighted Least Squares) para os espectros SERS e por EMSC (Extended Multiplicative Scatter Correction) para os espectros Raman, além de ser feito alisamento utilizando um filtro Savitzky-Golay. Os espectros Raman foram submetidos à uma análise multivariada MCR-ALS (Multivariate Curve Resolution - Asymmetric Least Squares) para se obter as imagens de diferentes componentes celulares e uma análise univariada dos espectros SERS, baseada na banda do MR, possibilitando obter as imagens dos sistemas AuNP/MR/Cu(isatp) e AuNP/MR/Cu(nisatp). O imageamento SERS e Raman das células HeLa mostraram que os complexos têm a capacidade de penetrar nas células, juntamente com as nanopartículas de ouro, e causar dano ao núcleo celular, sem a entrada de água na célula, característica não observada ao tratar as células com outros sistemas sem a presença dos complexos. Outro estudo realizado nesta dissertação foi a caracterização do complexo de superfície formado entre a 5-nitroisatina em nanopartículas de prata, através da espectroscopia SERS e Raman ressonante. Foi observado que o complexo de superfície apresenta uma grande deslocalização eletrônica frente às espécies moleculares estudadas para fins comparativos. Essa deslocalização gera um cromóforo distinto no complexo de superfície que possui uma transição eletrônica na região do verde do espectro visível, enquanto que as espécies moleculares apresentam transições na região do azul e ultravioleta.