Desenvolvimento e optimização de novos métodos (glico)proteômicos baseados em espectrometria de massas para análise de biomarcadores em plasma.

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Santana, Thaís Viggiani
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Biomarcadores; Biomarkers; Espectrometria de massas acoplada à cromatografia líquida (LC-MS); Glicanos; Glicomic; Glicômica; Glicoproteômica; Glycans; Liquid chromatographymass spectrometry (LC-MS); MALDI-TOF-MS; Plasma; Proteomic. Glicoproteomic; Proteômica
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-06092024-154320/

O plasma é um importante biofluído, de fácil acesso, representa o estado fisiológico de um organismo, é amostra alvo para análises clínicas e para descoberta de novos biomarcadores. O proteoma plasmático é considerado um dos mais complexos, pois contém inúmeras proteínas clássicas plasmáticas, imunoglobulinas e proteínas provenientes de tecidos. A técnica de espectrometria de massas acoplado à cromatografia líquida é considerada ideal para identificação e quantificação de proteínas em amostras complexas, tal como o plasma. No entanto, sua análise é muito desafiante devido ao alto alcance dinâmico de abundância de suas proteínas, superando a ordem de dez em magnitude. Além disso, em torno de 90% da massa total de proteínas é composta por apenas 14 proteínas, sendo a albumina a mais abundante. A análise proteômica de plasma deve, portanto, ser complementada por métodos que visam diminuir a complexidade da amostra e acessar o maior número possível de proteínas, principalmente as menos abundantes, que estão entre os promissores novos biomarcadores. Novos métodos de preparo de amostra que incluem fracionamento, depleção de proteínas mais abundantes, enriquecimento de proteínas menos abundantes, métodos de aquisição de dados e análise de dados por bioinformática estão em crescente demanda para colaborar com esta área. Neste trabalho, cinco métodos de preparo de amostras antes da análise por LC-MS/MS foram comparados com o objetivo de desenvolver e optimizar o melhor método para identificação e quantificação de proteínas e glicoproteínas em plasma de camundongo. Além disso, este trabalho também teve como foco análise de glicanos padrão por MALDI-TOF-MS, seguindo uma abordagem glicômica, para uma futura aplicação na análise de glicanos de glicoproteínas plasmáticas, dado que os glicanos têm papel fundamental no desenvolvimento de doenças.