Comportamento in vitro em Vitis spp. e em Passiflora nítida H.B.K.

• Ano de defesa: 1999
• Autor(a) principal: Passos, Ilene Ribeiro da Silva
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: CLONAGEM; CULTIVO IN VITRO; EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA; MARACUJÁ DOCE; UVA
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-20200111-133617/

Embriões somáticos foram obtidos a partir de discos foliares de videira do cultivar Seyve Villard 5276 e de um clone híbrido F1 entre ‘Madalena’ (Vitis spp.) e ‘Magnólia’ (Vitis rotundifolia), oriundos de clonagem in vitro. O protocolo para obtenção de embriões somáticos baseou-se no de HARST (1995) modificado, sendo que a PHE (fenilalanina) foi substituída pela PVP-40 (polivinilpirrolidona). O efeito benéfico da PVP-40 na embriogênese somática foi verificado em outro experimento para o cv. Seyve Villard 5276. A porcentagem de explantes embriogênicos foi de 82,0±5,8% em relação a 40,0±15,2% do controle (- PVP e -PHE). Quando se usou 10 g.L-1 de PVP-40, o número de embriões por explante foi de 95,5±13,4. A PHE na concentração de 2,5mM (HARST, 1995) foi prejudicial à expressão do potencial embriogênico dos explantes de Seyve Villard 5276. A via embriogênica foi confirmada por análises histológicas e ultraestruturais que também revelaram o desenvolvimento teratológico dos embriões devido à presença de protoderme indefinida, ausência de meristema de caule, diferenciação precoce de elementos traqueais e mais de dois cotilédones. Embriões secundários foram observados e documentados pela microscopia eletrônica de varredura. Estudou-se igualmente o comportamento in vitro de Passiflora nitida H.B.K., espécie com potencial para cultivo e como fonte de genes de resistência a doenças em programas de melhoramento do maracujazeiro. Fez-se uma observação preliminar em campo onde se avaliou algumas características agronômicas. Descreveu-se pela primeira vez o cariótipo dessa espécie. Foram estabelecidos protocolos para a introdução in vitro de ápices caulinares e segmentos nodais, estabelecimento e cultura de células em suspensão, organogênese a partir de discos foliares e isolamento e cultura de protoplastos de P. nitida. Para a descrição do cariótipo e para a introdução in vitro de ápices caulinares e segmentos nodais utilizou-se estacas de P. nitida enraizadas e brotadas em cada de vegetação. Nos demais experimentos utilizou-se explantes foliares de plantas introduzidas in vitro através de sementes. P. nitida apresentou 2n = 18 cromossomos com constrições secundárias nos pares 3, 4 e 8. Apresentou comprimento do lote haplóide de 28,14 ± 5,5μm sendo que a constrição no cromossomo 3, diferencia citologicamente esta espécie das demais do gênero. Verificou-se que os segmentos nodais são os explantes mais adequados à introdução in vitro de P. nitida e que a adição de citocinina 6-BA ao meio MS é essencial. A cultura in vitro não induziu alterações no número de cromossomos das plantas avaliadas. A adição ao meio MS de picloram (2,4 e 4,8mg.L-1) foi satisfatória ao estabelecimento de suspensões celulares de P. nitida enquanto a adição de NOA e 6-BA favoreceu a formação de calos compactos cujas células não se desprenderam em suspensão. Observou-se organogênese direta em P. nitida, 56 dias após a introdução de discos foliares in vitro em meio MS contendo 1,0mg.L-1 de 6-BA A adição de água de coco (5%) foi prejudicial à expressão morfogênica desses explantes. O cultivo de protoplastos de P. nitida na densidade de 1,0 x 105 protoplastos por mL de meio de cultura, imobilizados em alginato, foi um procedimento adequado para a obtenção de microcolônias.