Estudo da função de SPI-22 T6SS de Salmonella bongori em competições bacterianas e interações com células fagocíticas.

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Limache, Daniel Enrique Sanchez
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Salmonella bongori; Efetores; Effectors; SPI-22; T6SS; VRR-Nuc
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-17052022-110306/

Bactérias desenvolveram mecanismos de antagonismo para atacar espécies competidoras e garantir vantagem adaptativa. O T6SS (type 6 secretion system) é um sistema de secreção de proteínas que se assemelha funcionalmente a um arpão contrátil, no qual uma lança composta por proteínas Hcp (hemolysin-coregulated protein), VgrG (valine-glycine repeat protein G) e PAAR (proline-alanine-alaninearginine) é lançada em direção a célula alvo liberando efetores tóxicos. Em Salmonella spp., os genes responsáveis pela montagem do T6SS ficam agrupados em ilhas de patogenicidade (Salmonella Pathogenicity Islands, SPI). Salmonella bongori possui a SPI-22 que codifica um T6SS exclusivo desta espécie; no entanto, sua função ainda não havia sido caracterizada. O objetivo deste trabalho foi analisar a função de SPI-22 T6SS de S. bongori quanto a sua atividade antibacteriana e anti-eucariótica. Os resultados demonstram que SPI-22 T6SS tem função antibacteriana. Análises in silico identificaram diversos possíveis efetores secretados pelo SPI-22 T6SS. Dentre esses efetores, escolhemos quatro genes que possuem domínio VRR-Nuc (virus-type replication-repair nuclease) para caracterização funcional (SBG_1828, SBG_1841, SBG_2718 e SBG_2723). SBG_2723 e SBG_1841, renomeados TseV2 e TseV3 (type VI effector with VRR-Nuc), apresentaram toxicidade quando expressos em Escherichia coli; enquanto SBG_2718 e SBG_1828, renomeados TseV1 e TseV4, não afetaram o crescimento dessa bactéria. Ensaios de competição bacteriana confirmaram que TseV2 e TseV3 são secretados via SPI-22 T6SS. Além disso, ensaios de competição bacteriana revelaram que as proteínas VgrG2 (SBG_2715) e VgrG3 (SBG_3770) são importantes para secreção de TseV2 e TseV3, respectivamente. Para testar a atividade anti-eucariótica de SPI-22 T6SS, realizamos ensaios de resistência a predação por Dictyostelium discoideum, avaliando a capacidade dessa ameba em formar placas de fagocitose ao se alimentar das cepas selvagem e mutante T6SS. Resultados preliminares sugerem que o mutante T6SS possa ser mais susceptível a predação; no entanto, mais estudos serão necessários para esclarecer essa função. Nesse trabalho caracterizamos a função de SPI-22 T6SS e identificamos novos efetores secretados por esse sistema, demonstrando a participação de diferentes VgrG na seleção.