Identificação de genes codificadores de serina/treonina fosfatases em Dictyostelium discoideum e caracterização funcional da proteína fosfatase do tipo 4 (PP4)

• Ano de defesa: 2003
• Autor(a) principal: Fiorini, Leonardo Costa
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Dictyostelium discoideum; DNA; Enzimas; Enzimes; Fosfatase; Microbiologia; Microbiology; Phosphatase; PP4
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11052007-130953/

As serina/treonina fosfatases (PPs) são enzimas responsáveis pela desfosforilação de resíduos de fosfoserina e/ou fosfotreonina e estão subdivididas em duas famílias gênicas designadas PPP e PPM. A família PPP está dividida em cinco subfamílias, que compreendem as PPs do tipo 1 (PP1), 2A (PP2A), 2B (PP2B), 5 (PP5) e 7 (PP7), de acordo com a similaridade entre as sequências de aminoácidos das subunidades ou domínios destas enzimas. Novas PPs estão sendo descobertas em diferentes organismos e classificadas nestas famílias ou subfamílias com base na análise comparada de suas sequências. Uma delas é a proteína fosfatase do tipo 4 (PP4), descoberta originalmente em coelhos e cujas funções biológicas vêm sendo progressivamente elucidadas. Neste estudo tivemos como objetivos a identificação e caracterização de uma nova serina/treonina fosfatase de Dictyostelium discoideum. Para isto, rastreamos uma biblioteca de cDNA e um cDNA completo que codifica a subunidade catalítica da fosfatase do tipo 4 (PP4c) foi isolado e seqüenciado. Verificamos que o gene da PP4c é essencial e está presente em cópia única localizada no cromossomo 2, originando um mRNA expresso ao longo de todo o ciclo de vida de D. discoideum. Imunodetecção da PP4c realizada com anticorpo específico indicou que os níveis desta proteína também são constitutivos. Observamos que a superexpressão da PP4c sob o controle de um promotor constitutivo não causa alterações fenotípicas detectáveis. A análise da localização celular da PP4c expressa em células de D. discoideum como proteína de fusão com GFP (Green Fluorescent Protein) revelou que a enzima está localizada no citossol, contrastando com outros organismos, onde ela se encontra enriquecida no centrossomo. Por fim, descrevemos neste trabalho, além da organização genômica da PP4, a estrutura dos genes de todas as serina/treonina fosfatases da família PPP encontradas no cromossomo 2 e apresentamos dados das relações entre estas enzimas de D. discoideum.