Clonagem e caracterização da estrutura e expressão de um gene amplificado no pufe de DNA B-10 de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae)

• Ano de defesa: 1996
• Autor(a) principal: Fontes, Aparecida Maria
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bradysia hygida; DNA; Genética; Genetics
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-13062023-170520/

Neste trabalho aprofundamos a caracterização molecular de um fragmento de 2 kb-EcoRI previamente demonstrado amplificar no pufe de DNA B10 de B. hygida e conter sequências complementares à duas espécies de mRNA reguladas durante o desenvolvimento da glândula salivar do último estágio larval (Fontes et al.,1992). O sequenciamento deste fragmento de 2 kb e de um cDNA de 1 kb a êle complementar, em associação com experimentos de \"5\' extension\", resultou no mapeamento fino de uma unidade de transcrição no fragmento de 2 kb. Na análise da sequência de 816 pb que flanqueia a unidade de transcrição a 5\' nós identificamos sequências similares a elementos provados experimentalmente participar da regulação da transcrição de genes de Drosophila pelo hormônio ecdisona. Neste segmento de 816 pb nós também encontramos sequências similares a sequências conservadas no elemento ACE, geneticamente definido como controlador da amplificação gênica no domínio coriônico de Drosophila, e com a sequência ACS essencial para o funcionamento das sequências ARS como origens de replicação em cromossomos de levedura. A análise das pontas 5\' e 3\' dos mRNAs do gene BhB10, realizada através de experimentos de \"5\' extension\" e por avaliação do tamanho das mensagens após a retirada da cauda poli A, indica que o gene BhB10 codifica uma mensagem que sofre um encurtamento da cauda poli A durante o desenvolvimento. O papel desse processo na expressão da proteína não foi abordado experimentalmente neste trabalho. A sequência de aminoácidos deduzida da fase de leitura aberta presente no cDNA indica que a proteína codificada pelo gene BhB10 é secretada pela glândula. Ainda neste trabalho, experimentos de hibridação em \"northern blot\" mostram que os mRNAs do BhB10 estão presentes nas três diferentes regiões da glândula salivar de B. hygida. Uma vez que em uma destas regiões (chamada S2) o pufe B10 não se forma, nossos resultados indicam que a formação deste pufe não é consequência da atividade transcricional per se. Em vez disto, como sugerido por resultados preliminares não apresentados aqui, a falta de amplificação desse gene na região glandular S2 poderia explicar o fato do pufe de DNA não se formar em cromossomos de S2. Nossas observações de que na região S2 os mRNAs do gene BhB10 estão presentes em menor quantidade, quando comparado às outras duas regiões glandulares, são compatíveis com a falta de amplificação gênica na região S2 e enfatizam o papel da amplificação gênica como um mecanismo de controle da expressão gênica.