Clonagem, expressão e purificação das proteínas de superfície, PsaA e fragmentos de PspA de Streptococcus pneumoniae

• Ano de defesa: 2005
• Autor(a) principal: Silva, Marcelo da
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Clonagem; Cloning; Genic expression; pneumococcus; Pneumococos; Pneumonia; Proteínas recombinantes; Purificação de PsaA e PspA; Purification of PsaA and PspA; Recombinant Proteins; Steptococcus; Streptococcus; Vaccines; Vacinas
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-27102005-163558/

Streptococcus pneumoniae é o principal causador da pneumonia bacteriana. As vacinas atualmente disponíveis contêm polissacarídeo capsular conjugado ou não com proteínas carreadoras. No entanto, elas apresentam elevado custo ou proteção reduzida nos grupos de risco (crianças abaixo de 5 anos de idade e idosos). Proteínas de superfície de S. pneumoniae, como a PsaA e PspA, são consideradas fortes candidatas vacinais. Com o objetivo de se desenvolver uma vacina de ampla cobertura e baixo custo contra pneumococos, os genes psaA e pspA foram clonados em vetores de expressão em E. coli, pAE e pET e as proteínas expressas foram purificadas por cromatografias de afinidade e de troca aniônica. O rendimento de proteína recombinante obtido com a construção baseada em pET foi 3 vezes maior que o obtido com pAE. Condições de cultivo foram estabelecidas utilizando meio definido com indução por IPTG e/ou por lactose. As cepas recombinantes estão adequadas para serem usadas em estudos para escalonamento da produção em biorreatores.