Efeito da infecção por vírus Zika na expressão gênica de Calreticulina em Aedes aegypti.

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Almeida, Laisa Silva de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Arbovirose; Arbovirus; Culicidae; Parasita; Parasite; Vector; Vetor; ZIKV
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-06092024-165059/

O vírus Zika (ZIKV) é um arbovírus que causa uma doença febril, que desenvolve grande interesse para a saúde pública por provocar manifestações neurológicas ou congênitas, como a microcefalia em fetos. A sua transmissão ocorre principalmente por meio da picada de uma fêmea de Aedes aegypti infectada, espécie de mosquito amplamente distribuída no mundo e reconhecida como vetora de outros vírus como dengue e chikungunya. Diante do importante papel do Ae. aegypti no ciclo de transmissão de ZIKV e da ausência de vacina para esta arbovirose, a ciência da Parasitologia enfatiza a realização de estudos investigando as alterações que o vírus causa no mosquito. A partir de nossos resultados preliminares de transcriptoma de Ae. aegypti infectado por ZIKV, identificamos a indução do gene codificador da proteína calreticulina (CRT), uma proteína multifuncional, estudada em diversas espécies pela interação com partículas estranhas ao organismo. Com isso, o presente estudo teve como objetivo, investigar a relação entre infecção por ZIKV e expressão gênica da CRT em Ae. aegypti. Para a análise bioinformática do transcriptoma, foram realizados o alinhamento das possíveis isoformas de CRT comparadas a sequência depositada no NCBI. Para as análises experimentais, foram realizadas de forma artificial, a infecção de fêmeas do mosquito com ZIKV e testado por qPCR a expressão de CRT em 3, 7 e 14dpi. As fêmeas com 3dpi foram avaliadas para a quantificação da carga viral de ZIKV e posterior análise de correlação com a expressão gênica de CRT. Para o silenciamento, foram testadas três concentrações de dsCRT para avaliação da eficiência e tempo de duração do silenciamento. O transcriptoma apresentou três isoformas de CRT, duas no sentido senso (CRT_S1 e CRT_S2) e uma antissenso (CRT_AS), com perfis de expressão diferentes durante a infecção por ZIKV. Com a análise bioinformática foi identificado que a CRT_S1 e CRT_S2 apresentam alta similaridade com a sequência depositada no NCBI e a CRT_AS, pode ser caracterizada como um RNA antissenso natural, possivelmente atuando na regulação de expressão gênica, entre outras funções. A presença de isoformas de CRT em Ae. aegypti ainda não havia sido descrita na literatura. De acordo com os resultados obtidos, foi observada grande variabilidade na expressão gênica de CRT entre as fêmeas analisadas, nos três períodos, dificultando a acurácia na análise estatística dos dados. Com isso, não foi possível concluir se a CRT é modulada em Ae. aegypti, durante a infecção por ZIKV. Na análise de correlação entre a carga viral de ZIKV e a expressão gênica de CRT, os resultados indicaram uma correlação negativa, onde as fêmeas que apresentam maior carga viral tendem a apresentar expressão gênica de CRT reduzida. Para o silenciamento por RNAi, as concentrações de dsCRT testadas não resultaram em redução na expressão gênica de CRT, mas em aumento na variabilidade gênica intra-grupo, possivelmente na tentativa de retornar ao nível de expressão normal. Espera-se que esses resultados venham a contribuir para o entendimento do papel da CRT no mosquito durante a infecção por ZIKV, assim como as suas diversas funções desempenhadas no organismo.