Tipagem por MALDI-TOF MS e sensibilidade aos antimicrobianos de Prototheca spp. isolados de mastite bovina

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Fidelis, Carlos Eduardo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Desinfetantes; Disinfectants; Microalga; PCR; Resistance; Resistência; Sensibilidade; Sensibility
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10135/tde-04032022-103230/

Prototheca spp. é uma microalga unicelular que pode causar infecções oportunistas em humanos e animais. Este patógeno apresenta elevada resistência aos antimicrobianos convencionais e os atuais métodos de identificação de Prototheca spp. são demorados e com elevado custo. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram (a): avaliar o uso da técnica de MALDI-TOF MS para identificação em nível de espécie de isolados de Prototheca spp. causadores de mastite bovina; (b) identificar a capacidade de produção de biofilme e (c) a sensibilidade in vitro de Prototheca spp. diante do polihexametileno biguanida (PHMB) e desinfetantes utilizados antes e após ordenha (hipoclorito de sódio, dicloroisocianurato de sódio, clorexidina e iodo-povidona). Um total de 87 isolados de Prototheca spp. foram submetidos a extração de proteínas ribossomais por beads de zircônia, e posteriormente identificados por MALDI-TOF MS pelo software Biotyper suplementado com espectros de referência. Para determinação do perfil de sensibilidade in vitro, os isolados de Prototheca spp. foram submetidos a avaliação de concentração inibitória mínima (CIM) e concentração algicída mínima (CAM) pelo método de microdiluição em caldo. A capacidade de formação de biofilme foi avaliada pelo método de incubação em microplacas de fundo chato e, posteriormente, os isolados foram classificados como fortes, moderados, fracos e não formadores de biofilme. A MALDI- TOF MS possibilitou a identificação de 73 (73/85) isolados como P. bovis e 2 (2/2) isolados como P. blaschkeae, sendo que, 12 (12/85) isolados de Prototheca foram identificados em nível de gênero. Do total dos isolados de P. bovis identificados por PCR, 63,5% (54/85) foram classificados como fortes, 28,2% (24/85) moderados, e 8,2% (7/85) fracos produtores de biofilme. Por outro lado, um isolado de P. blaschkeaefoi classificado como fraco e o outro como moderado produtor de biofilme. A PHMB (CIM90: ≥2 μ g/ml e CAM90: ≥4 μ g/ml) e o gluconato de clorexidina (CIM90 e CAM90: ≥2 μ g/ml), apresentaram os menores valores de CIM e CAM, seguido de dicloroisocianurato de sódio (CIM90 e CAM90: ≥1.400 μ g/ml), hipoclorito de sódio (CIM90 e CAM90: ≥2.800 μ g/ml), e iodo-polivinilpirrolidona (CIM90 e CAM90: ≥3.200 μ g/ml). Concluímos que o uso da MALDI-TOF MS permite a rápida identificação de isolados de Prototheca spp. em nível de espécie. Mais de 90% dos isolados de P. bovis apresentaram elevada capacidade de formação de biofilme. Dentre os desinfetantes, PHMB e o gluconato de clorexidina apresentaram os menores valores para inibição e inativação dos isolados de Prototheca spp. Sendo assim, estes antimicrobianos podem ser utilizados como alternativa antes e após a ordenha para o controle da disseminação de Prototheca spp. no rebanho.