Bases moleculares da ativação da enzima conversora de angiotensina I (ECA) na hipertrofia cardíaca no rato

• Ano de defesa: 1999
• Autor(a) principal: Oliveira, Edilamar Menezes de
• Orientador(a): Krieger, Jose Eduardo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Angiotensinas; Cardiomegalia; Ratos
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/272064

Neste trabalho demonstramos que seqüências regulatórias contidas na região promotora do gene da enzima conversora de angiotensina I (ECA) participam da ativação do gene durante o desenvolvimento da hipertrofia cardíaca no rato. Para determinar a atividade da ECA no plasma e em diferentes tecidos na hipertrofia cardíaca foi necessário padronizar uma metodologia para medida da atividade da enzima em diversos tecidos de ratos. Isoproterenol (0,3 mg/Kg/dia, sc, 1 semana) resultou em hipertrofia cardíaca (36%) com aumento da expressão (58%) e da atividade da ECA (67%) no ventrículo esquerdo. O sistema de gene reporter baseado na luciferase foi utilizado para identificar as seqüências regulatórias do gene da ECA associadas a esta resposta. O desenvolvimento de hipertrofia se acompanhou de ativação da luciferase (3,5X) numa construção contendo 1273 pb do promotor da ECA indicando, assim, a presença de seqüências que ativam o gene no fragmento estudado. O mapeamento das seqüências regulatórias do gene da ECA associada a ativação do gene foi feita através da análise de uma série de mutantes contendo deleções progressivas do promotor (-1089, -477, -385, -252, -199, e -94 pb). Os dados obtidos sugerem que seqüências regulatórias importantes para ativação do gene da ECA durante o desenvolvimento da hipertrofia cardíaca estão localizados no intervalo entre -1089 e -477 pb do promotor. Nesta região existem várias seqüências regulatórias que potencialmente poderiam participar desta resposta. Baseado em dados prévios do laboratório a seqüência "CRE-like" que responde a estimulação por AMPc foi analisada. Estudos envolvendo mutagênese sítio dirigida desta seqüência, entretanto, excluíram esta possibilidade. Em conjunto, os resultados demonstram que seqüências regulatórias contidas no intervalo -1089 a -477 pb do promotor causam o aumento de expressão da ECA durante o desenvolvimento de hipertrofia cardíaca no rato.