Investigação da modulação do sistema purinérgico sobre a resposta celular a quimioterápicos em linhagens de câncer de bexiga

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Silva, Álisson Coldebella da
• Orientador(a): Figueiró, Fabrício
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Neoplasias da bexiga urinária; Linhagem celular tumoral; Antineoplásicos; 5'-nucleotidase; Purinas
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/264231

O câncer de bexiga (CB) é um dos 10 tipos de câncer mais prevalentes em todo o mundo, e a segunda neoplasia urogenital mais comum, atinge principalmente indivíduos do sexo masculino e está relacionado com o tabaco e a idade avançada. O prognostico dos pacientes com CB é preocupante, visto que os tratamentos atuais não são eficazes, e permitem em muitos casos a reincidência do tumor. A sinalização purinérgica é controlada principalmente pela cascata enzimática envolvendo a família NTPDase/E-NPP e ecto-5'-nucleotidase/CD73, que hidrolisam adenosina trifosfato (ATP) extracelular em adenosina (ADO). Alguns trabalhos revelam alteração na expressão das enzimas NTPDase3 e CD73 durante a progressão do CB em camundongos. A ADO gerada da ação destas enzimas desempenha um importante papel no microambiente tumoral agindo como mediador imunossupressor promovendo a proliferação, angiogênese e resistência tumoral. O Bozepinib (BZP) é um interessante candidato a quimioterápico. Estudos mostram suas promissoras atividades farmacológicas, com destaque para sua potente e seletiva ação antitumoral e antimetastática in vitro e in vivo em câncer de mama, cólon, glioblastoma e melanoma. Nessa circunstância, um dos objetivos desse trabalho foi avaliar a ação citotóxica do BZP em linhagens de CB, e no sistema purinérgico. Nossos primeiros resultados, mostram que o BZP apresentou atividade citotóxicas em células de CB (RT4 e T24) com baixos valores de IC50 quando comparado a uma linhagem celular de fibroblasto humano (MRC-5). Vimos que o tratamento com o BZP induz morte celular por apoptose, com alteração na progressão do ciclo celular e com apenas três ciclos de tratamento as células T24 foram totalmente eliminadas. Além disso, o BZP foi capaz de modular o sistema purinérgico, aumentando a expressão e a atividade de hidrólise da enzima NPP1. Esses resultados mostram que o BZP apresenta uma interessante atividade contra linhagens de CB, porém mais estudos são necessários a fim de compreender o seu mecanismo de ação e toxicidade in vivo. Além disso, também decidimos verificar o envolvimento das enzimas NTPDase3 e CD73 na resistência ao tratamento com os Cisplatina (CIS), Gemcitabina (GEM) e Paclitaxel (PTX), principais quimioterápicos utilizados no CB. Para tanto, a NTPDase3 foi super expressa na linhagem T24, por transfecção com pcDNA3, e a CD73 foi silenciada utilizando o sistema CRISPR/Cas. Os clones de cada transfecção foram caracterizados mostrando o sucesso de ambas transformações genéticas. Os resultados mostram que a super expressão da NTPDase3 tornou a linhagem T24 mais resistente aos tratamentos, enquanto o silenciamento da CD73 deixou a linhagem mais sensível ao tratamento com GEM e PTX, enquanto se tornou mais resistente à CIS. Mais estudos são necessários para aprofundar o papel das enzimas purinérgicas na sensibilidade e/ou resistência aos quimioterápicos no tratamento do CB.