Caracterização molecular e fatores de virulência de Clostridium difficile em estudo epidemiológico multicêntrico no Brasil

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Saldanha, Gabriele Zvir
• Orientador(a): Martins, Andreza Francisco
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Clostridioides difficile; Tipagem de sequências multilocus; Fatores de virulência
• Palavras-chave em Inglês: Clostridium difficile; MLST; Virulence factors
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/203865

A doença associada ao Clostridium difficile (CDI) é mundialmente reconhecida como um problema de saúde pública, sendo a tipagem molecular uma ferramenta importante para o entendimento da disseminação da bactéria. Esse trabalho tem como objetivo identificar as STs (sequence type) de isolados de C. difficile através da tipagem molecular por MLST (multilocus sequence type), bem como identificar os fatores de virulência e resistência associados a essas cepas. Foram coletadas amostras de fezes diarreicas oriundas de oito hospitais de três estados brasileiros em dois dias pré-estabelecidos e 80 amostras de carnes embaladas. Para o isolamento da bactéria, utilizou-se o meio seletivo C. difficile CM0601 (Oxoid) suplementado com D-cicloserina e cefoxitina, em atmosfera de anaerobiose. MALDI-TOF MS (Bruker) foi utilizado para a identificação da bactéria em nível de espécie. O MLST foi realizado baseado no sequenciamento dos genes housekeeping: adk, atpA, dxr, glyA, recA, sodA e tpi. Para a análise dos fatores de virulência, sete amostras foram submetidas ao sequenciamento de nova geração pela plataforma Illumina Miseq. Em 13 amostras foi realizado o teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM) através do método de ágar diluição para os antimicrobianos metronidazol e vancomicina. Do total de 153 amostras analisadas, foram recuperados das fezes 17 isolados de C. difficile, identificando-se as ST2, ST15, ST35, ST42, ST54, ST67 e oito novas STs. Genes de resistência como ermB, tetM, VanW e nimb, e outros genes associados aos fatores de virulência, como cwp84, cwp66, cwp2, fbpA e secA foram encontrados em cepas toxigênicas. A CIM apresentou isolados resistentes à vancomicina e ao metronidazol. A bactéria não foi encontrada em amostras de carnes. As diferentes STs encontradas no estudo revelam a grande variabilidade de cepas de C. difficile que circulam em hospitais brasileiros, contribuindo para um melhor entendimento da dinâmica de distribuição da bactéria no país.