Avaliação de pequenos RNAs regulatórios em leveduras patogênicas e seu potencial na interação patógeno-hospedeiro

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Streit, Rodrigo Silva Araujo
• Orientador(a): Staats, Charley Christian
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Cryptococcus; Candida; MicroRNAs
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/281697

Fungos patógenos humanos vêm ganhando notoriedade epidemiológica com o atual aumento do número de indivíduos imunocomprometidos, de maneira a se tornar um problema de saúde pública especialmente em países de baixa renda. Dentre os principais patógenos fúngicos cujas infecções apresentam risco de óbito ao hospedeiro encontram-se as leveduras dos gêneros Cryptococcus e Candida, que apresentam características epidemiologicamente relevantes, como a existência de linhagens hiper-virulentas no gênero Cryptococcus, capazes de infectar indivíduos imunocompetentes, assim como de linhagens resistentes aos antifúngicos disponíveis para comercialização no gênero Candida. Dada a necessidade de novos e mais eficazes tratamentos para infecções causadas por esses patógenos, a avaliação do processo de infecção é o passo inicial para a descobertas de novos mecanismos-alvo para fármacos. Enquanto que pequenos RNAs são reconhecidamente associados com a regulação de diversos processos celulares, incluindo a auto-regulação durante processos infecciosos tanto por parte do patógeno quanto do hospedeiro, pouca informação se encontra disponível quanto ao papel que essas moléculas exercem na comunicação entre patógeno e hospedeiro no contexto da infecção. Além disso, classes recentemente descobertas de pequenos RNAs, ainda pouco elucidadas, podem apresentar atuação em vias relacionadas à patogênese. Assim, um melhor entendimento dos mecanismos associados a essas moléculas é necessário, podendo ser facilitado pelo desenvolvimento de novas metodologias para identificação e estudo das mesmas. A presente tese tem por objetivo avaliar a presença de diferentes tipos de pequenos RNAs em leveduras dos gêneros Cryptococcus e Candida a fim de elucidar a associação de pequenos RNAs com mecanismos de auto-regulação celular e de interação com o hospedeiro durante infecções, além de produzir novas metodologias para a análise de pequenos RNAs. Através da metodologia in silico desenvolvida para o tratamento de dados de sRNA-seq, foram identificados fragmentos de RNA derivados de tRNAs (tRFs) em leveduras do gênero Cryptococcus em linhagens deficientes e proficientes na via de RNAi canônica, sugerindo a existência de múltiplos mecanismos associados a esses sRNAs no gênero. Além disso, foram identificados tRFs e miRNAs em vesículas extracelulares de Candida auris, assim como os possíveis alvos para esses sRNAs no conjunto de mRNAs de mamíferos. Por fim, foi desenvolvida uma nova ferramenta para a predição de tRFs in silico, com o objetivo de prover uma alternativa que una uma análise organismo-independente e com suporte estatístico à uma execução simples. Assim, a presente tese constitui base para futuras pesquisas em múltiplas linhas associadas a sRNAs regulatórios, evidenciando a existência de mecanismos celulares ainda não totalmente explorados, assim como provendo novas ferramentas para o seu estudo.