Criopreservação de sêmen de zebrafish

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Rodrigues, Rômulo Batista
• Orientador(a): Streit Júnior, Danilo Pedro
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Danio rerio; Stress oxidativo; Criopreservação; Sêmen
• Palavras-chave em Inglês: Oxidative stress; DNA damage; Powdered milk; Systematic review
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/233139

O zebrafish apresenta diversas características interessantes, que fazem da espécie um modelo biológico popular para estudos de diversas áreas de pesquisa, resultando em um elevado desenvolvimento de novas linhagens que precisam ser mantidas e preservadas. A criopreservação pode atender essa necessidade de manter os recursos genéticos da espécie, o que torna o desenvolvimento de pesquisas na área de suma importância. Esta tese tem como objetivo principal realizar um levantamento do histórico da pesquisa sobre criopreservação em zebrafish e realizar o desenvolvimento de protocolos de criopreservação de sêmen de zebrafish utilizando diversos tipos de avaliações sobre os danos causados pelo processo criopreservação. O objetivo do primeiro estudo foi realizar uma revisão sistemática sobre a criopreservação de tecidos e células reprodutivas de zebrafish. Na revisão sistemática foi possível identificar e quantificar as principais características dos protocolos de criopreservação já utilizados em diferentes tipos de amostras. Com os resultados obtidos nesse estudo foi possível identificar limitações e tendências para novas pesquisas, além de confirmar que assim como em outras espécies de peixes, a criopreservação de sêmen é o método mais efetivo para preservação do material genético do zebrafish. No segundo estudo objetivou-se avaliar a combinação e interação de diferentes extensores, crioprotetores permeáveis e não permeáveis, analisando os efeitos da criopreservação sobre os espermatozoides através de uma abordagem ampla de variáveis. Nesse estudo foi possível identificar que a utilização do leite em pó na solução crioprotetora promoveu maior proteção aos espermatozoides, especialmente quanto aos danos oxidativos e de DNA. No terceiro estudo o objetivo foi avaliar o estresse oxidativo e os danos no DNA em diferentes etapas do processo de criopreservação. Observou-se que a etapa de congelamento/descongelamento gerou mais danos que a exposição do sêmen aos crioprotetores durante o equilíbrio. Foi possível identificar que a utilização de leite em pó diminuiu a geração de espécies reativas de oxigênio e a fragmentação de DNA, além de promover maior atividade antioxidante. Com todos os resultados obtidos foi possível observar que a criopreservação de sêmen de zebrafish atualmente é a alternativa mais concreta para preservação do material genético da espécie, e que os protocolos de criopreservação de sêmen devem ser otimizados levando em consideração uma abordagem mais ampla das variáveis. Os bons resultados obtidos com a inclusão do leite em pó na solução crioprotetora indicam que a combinação entre crioprotetor permeável e não permeável pode melhorar os resultados obtidos após o processo de criopreservação.