Descelularização e recelularização de fígados para engenharia de tecidos e medicina regenerativa

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Borges, Mauricio Felisberto
• Orientador(a): Pranke, Patricia Helena Lucas
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Fígado; Transplante de células-tronco mesenquimais; Reatores biológicos
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/194828

Introdução: O único tratamento definitivo para a falência hepática é o transplante, porém existe um déficit muito grande entre o número de órgãos doados e a demanda de pacientes necessitando-os. Em tal contexto, a engenharia de tecidos propõe-se a produzir alternativas viáveis para sanar esse déficit. Uma técnica que vem ganhando destaque é a da descelularização e recelularização de órgãos. Essa técnica cria um scaffold natural e acelular e com as características do órgão utilizado, ideal para ser repovoado por células. As células-tronco mesenquimais são uma ótima opção para o repovoamento do órgão, pois apresentam a capacidade de se diferenciar em hepatócitos e tem uma capacidade replicativa alta. Objetivos: Descelularizar e recelularizar, com células-tronco mesenquimais isoladas de tecido pulpar de dente decíduo humano, a matriz extracelular de fígados proveniente de ratos, utilizando-se um biorreator produzido no laboratório. Métodos: Um biorreator de perfusão foi desenvolvido para utilização nos procedimentos de descelularização e recelularização do fígado. A descelularização dos fígados foi realizada pela a perfusão de uma solução de 0,5% de SDS. A esterilização do scaffold foi realizado com uma solução de ácido peracético 0,1% em etanol 4% durante 3h. A matriz foi lavada com PBS com antimicrobianos. A recelularização foi realizada com 108 células-tronco mesenquimais isoladas de dente decíduo as quais foram cultivadas durante 7 dias. Foram realizadas análises funcionais e estruturais nas matrizes descelularizadas e recelularizadas. Foram utilizados 4 fígados descelularizados e 5 fígados recelularizados para as análises. Resultados: As matrizes descelularizadas mostraram ausência de DNA com preservação do colágeno e dos GAGs, confirmando a eficiência do processo. A recelularização apresentou uma eficiência de retenção de 97% das células inseridas. As análises funcionais mostram que as células continuaram produzindo albumina e ureia na mesma quantidade que as células cultivadas em placa de cultura. Ocorreu um aumento do LDH nos primeiros dias de cultivo, sugerindo que as células morrem nos primeiros dias após a recelularização, mas estabilizam-se aos 7 dias de cultivo. A análise histológica mostrou conservação da trama de colágeno e algumas células agrupadas próximas aos vasos. Conclusão: Foi possível a construção e a utilização de um biorreator no laboratório para descelularizar e recelularizar com sucesso fígados de ratos com células-tronco mesenquimais, as quais mantiveram-se vivas e metabolicamente ativas durante 7 dias de cultivo. Apesar de as células, não terem sido capazes de se diferenciar em hepatócitos, durante o período estudo, sem nenhum estimulo químico, a recelularização dos fígados de ratos foi efetivada, criando uma nova via de pesquisa no laboratório para a construção de órgãos in vitro.