Aplicação de quimiometria nos parâmetros que influenciam a susceptibilidade e na identificação de fungos de importância médica

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Carvalho, Anderson Ramos
• Orientador(a): Fuentefria, Alexandre Meneghello
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Candida; Cryptococcus; Quimiometria
• Palavras-chave em Inglês: Digital images; FTIR; Yeast identificaton; DoE
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/264032

Leveduras de importância clínica como Candida spp. são microrganismos mais frequentemente isolados em infecções do trato urogenital, gastrointestinal e sanguíneo. A dificuldade em sua diferenciação e identificação devido à inespecificidade de testes bioquímicos ou ao não acesso às ferramentas mais precisas como as biomoleculares pode levar a recomendação de tratamentos menos efetivos. A similaridade com outras leveduras como as leveduras do gênero Cryptococcus pode ocasionar a erros de identificação e posteriormente tratamento. Além disso, a realização de testes de susceptibilidade através de inóculos com grande variabilidade causa prejuízos quanto à precisão do teste não concendendo ao analista poder decisório quanto à eficácia do antifúngico. Outros parâmetros como concentração de glicose, temperatura e pH podem influenciar o crescimento e inibição de leveduras de importância médica como as do gênero Candida. Assim, a presente tese teve como objetivo avaliar o preparo de inóculos do gênero Candida através da espectroscopia UV-Vis. Estimar o pH em meio de cultura em microvolumes através de imagens digitais. Estimar o impacto de pequenas alterações na temperatura, inóculo, pH e glicose no crescimento e inibição de cepas de Candida spp. Realizar a classificação de espécies de Candida através do emprego de imagens digitais oriundas de meio cromogênico. E, por fim, diferenciar e classificar leveduras do gênero Cryptococcus na presença de outras espécies de Candida spp. através do emprego da espectroscopia na região do infravermelho (FTIR) associada à quimiometria. Para atingir esses objetivos, foram utilizadas ferramentas quimiométricas que foram desde o delineamento experimental (DoE), regressão multivariada e classificação multivariada com diferentes matrizes de dados como imagens digitais, unidades de absorbância na espectroscopia ultravioleta e espectroscopia de infravermelho. Os resultados obtidos demonstraram que através da dispersão de quantidades conhecidas de blastoconídeos e obtenção de medidas espectrofotométricas permitiram maior precisão no preparo de inóculos. A determinação do pH através do emprego de imagens digitais em microvolumes em placas de 96 e 24 poços é uma opção vantajosa, pois permite a estimação do pH sem a quebra de esterilidade. Os resultados do DoE apontam 14 que mesmo pequenas modificações no inóculo, concentração de glicose e pH geram alterações significativas tanto para crescimento como para inibição. Imagens digitais do meio cromogênico associadas as ferramentas quimiométricas permitiram a classificação de cinco diferentes espécies de Candida com precisão e exatidão. E por fim, a diferenciação de duas espécies de Cryptococcus é possível mesmo com 13 outras espécies de Candida mostrando que o FTIR rivaliza em potencialidade com outras técnicas de identificação.