Aspectos analíticos da monitorizacão de vancomicina sérica : validação de método de coleta por sangue capilar e comparação entre métodos comerciais em pacientes dialíticos

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Zimmer, Letícia Vale Scribel
• Orientador(a): Zavascki, Alexandre Prehn
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Vancomicina; Espectrometria de massas em Tandem; Cromatografia líquida; Estudo de validação; Coleta de amostras sanguíneas; Teste em amostras de sangue seco
• Palavras-chave em Inglês: Vancomycin; Therapeutic drug monitoring; DBS; Liquid chromatography; CMIA; KIMS; CDP-1; Tandem mass spectrometry
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/247607

Base teórica: A vancomicina é um antimicrobiano amplamente utilizado como tratamento de primeira linha para infecções por Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). Na ausência de novas alternativas de antimicrobianos, o Monitoramento Terapêutico (MT) é essencial para otimizar a dosagem daqueles préexistentes. Assim, é possível aumentar a eficiência do tratamento minimizando efeitos adversos e prevenindo o surgimento de resistência microbiana. Considerando a importância da dosagem da concentração sanguínea no MT da vancomicina, dois trabalhos foram realizados. Trabalho 1. Objetivo: Desenvolvimento e validação analítica e clínica de um método de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em sequência (LC-MS/MS) para determinação simultânea de vancomicina e creatinina em amostras de sangue seco em papel, ou Dryed Blood Spots (DBS). Métodos: O método de LC-MS/MS para dosagem de vancomicina e creatinina em DBS foi validado de acordo com os parâmetros linearidade, precisão, acurácia e eficiência da extração. As concentrações de vancomicina e de creatinina foram então determinadas a partir de 54 e 35 amostras pareadas de DBS e de plasma, respectivamente, obtidas de 29 pacientes. Resultados: O método apresentou linearidade satisfatória com coeficientes de correlação acima de 0.99 para vancomicina e creatinina. Os resultados de precisão, acurácia e sensibilidade atenderam aos critérios de aceitação. As concentrações de vancomicina e creatinina em DBS e plasma foram significativamente correlacionadas: r = 0.892, p<0.01, n=54 e r = 0.945, p<0.01, n=35, respectivamente. Entretanto, as razões entre as concentrações de plasma e DBS para vancomicina foram altamente variáveis, em um intervalo de 1.148 a 5.022, com uma média de 2.36, enquanto que para creatinina variou entre 0.800 a 1.283, com uma média de 1.07. Conclusão: Um método de quantificação simultânea de vancomicina e creatinina em amostras de DBS foi desenvolvido e validado. Todos os parâmetros analíticos apresentaram critérios aceitáveis. Entretanto, os níveis plasmáticos de vancomicina não puderam ser preditos com acurácia a partir das amostras de DBS. Estudos devem ser realizados para determinar as causas da variabilidade das razões entre as concentrações de plasma e DBS. No entanto, as concentrações de creatinina em plasma foram satisfatoriamente preditas a partir de medidas em DBS. Trabalho 2. Objetivo: Avaliação do desempenho de dois tipos diferentes de imunoensaio comparados à LCMS/ MS em pacientes sob terapia de substituição renal. Estudos anteriores relatam a interferência de um produto de degradação da vancomicina chamado CDP-1 (do inglês Crystalline Degradation Product) em imunoensaios, que são os métodos mais utilizados para dosagem da vancocinemia, quando comparados com LC-MS/MS, método de referência. O CDP-1 tende a acumular em pacientes com insuficiência renal e valores falsamente elevados ou diminuídos de vancocinemia pode resultar em toxicidade, falha terapêutica e resistência bacteriana. Métodos: os resultados de 65 amostras de 43 pacientes analisadas por imunoensaio de micropartículas por quimioluminescência (CMIA) e 54 amostras de 24 pacientes analisadas por imunoensaio de interação cinética das micropartículas em solução (KIMS), foram comparados com os resultados obtidos por LC-MS/MS para as mesmas amostras. Resultados: As medidas de vancomicina por CMIS e KIMS foram altamente correlacionadas com LC-MS/MS e não foi observado desvio da linearidade. Os níveis séricos de vancomicina em pacientes dialíticos por LC-MS/MS foram, em média, 2.64% mais altos do que aqueles obtidos por CMIA e 8.81% mais altos do que aqueles obtidos por KIMS. Conclusão: A comparação entre os métodos CMIA e KIMS com LC-MS/MS para dosagem de vancocinemia em amostras de pacientes sob terapia de substituição renal apresentou correlação e concordância satisfatórias, o que permite concluir que não houve interferência do CDP-1 nos imunoensaios.