Controle de qualidade de doses inseminantes suínas : aspectos quantitativos e qualitativos

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Santos, Monike Quirino dos
• Orientador(a): Bortolozzo, Fernando Pandolfo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Concentração espermática; Motilidade espermática; Citometria de fluxo; Dose inseminante; Células mortas; Qualidade do sêmen; Suínos
• Palavras-chave em Inglês: Quality control; Semen doses; Flow cytometry; Boar semen
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/277371

Apesar dos atuais e expressivos esforços empregados pelas centrais de inseminação artificial para garantir a qualidade das doses inseminantes suínas, ainda existem lacunas a serem preenchidas bem como oportunidades a serem exploradas no que diz respeito ao processo de controle de qualidade. Desta forma, foram conduzidos cinco experimentos para melhor compreender a influência de fatores quanti e qualitativos sobre a qualidade espermática e, também, para otimizar o processo de avaliação da qualidade das doses inseminantes suínas. O primeiro estudo avaliou o efeito de doses de sêmen suíno com diferentes concentrações espermáticas em 50 mL de Androstar Plus® (APlus; 20, 30, 60 e 100 × 106 células/mL) sobre a qualidade espermática e observou-se aumento da motilidade total (MT) à medida que a concentração espermática aumentou de 20 para 30 × 106 células/mL. Porém, a MT diminuiu conforme a concentração de células aumentou para 60 e 100 × 106/mL (P quadrático < 0,01). Além disso, os valores limite para atingir pelo menos 70% de MT às 120 h de armazenamento foram 4 e 59 × 106 células/mL, enquanto o valor que não afetou mais a MT foi de 50 × 106 células/mL (72% de MT). O segundo estudo comparou doses com baixa concentração espermática (16,7 × 106 células/mL em 90 mL) e doses mais concentradas (33,3 × 106 células/mL em 45 mL) produzidas com BTS ou APlus. Os dados demonstraram que, após 300 min de incubação a 38°C (teste de termorresistência; TTR), as doses de baixa concentração perderam 2 a 3 vezes menos pontos percentuais (pp) de MT em relação às doses com 33,3 × 106 células/mL (P < 0,01) independentemente do tipo de diluente. No terceiro estudo, foi verificada a influência de diferentes proporções de espermatozoides mortos (25%, 50% e 75%) na qualidade de doses de sêmen suíno ao longo do TRT (30 e 300 min). No início do teste, os tratamentos apresentaram medianas para MT de 77,6%, 50,2% e 25,6%, respectivamente. As doses com 25%, 50% ou 75% de células mortas perderam uma proporção semelhante de MT ao longo do TTR: 25% = -11,9%, 50% = -16,0% e 75% = -17,5% (P = 0,31). Além disso, a variação relativa dos parâmetros analisados por citometria de fluxo (CF) sugeriu que a presença das células mortas não alterou substancialmente a estrutura espermática ao longo do TTR. O quarto estudo comparou diversos protocolos de CF (BEADS: SYBR+PI+beads; SYBR, SYBR+PI, SYTO-24, TRITON: Triton+PI e GATING) com métodos convencionais para mensurar a concentração espermática de doses de sêmen suíno (NEUB: Câmara de Neubauer; CASA: Sistema computadorizado; NC: NucleoCounter). Todos os protocolos de CF apresentaram maior coeficiente de variação entre as duplicatas (CV) em comparação com NEUB (4,9%) ou CASA (3,6%), enquanto os métodos NEUB e CASA apresentaram o menor CV (4,9 e 3,6%, respectivamente). Baixos coeficientes de concordância de correlação (CCC) foram observados entre os protocolos de CF e os métodos convencionais, bem como entre os próprios protocolos de CF (BEADS vs. SYTO-24 = 0,10). Por fim, o último estudo desenvolveu um painel de CF com cinco fluorocromos para analisar simultaneamente atividade mitocondrial (A), grau de desorganização lipídica da membrana plasmática (B), integridade da membrana plasmática (C) e status acrossomal (D) em doses de sêmen suíno, adicionando-se um marcador de DNA (E). Fortes correlações e valores moderados e substanciais de CCC entre os ensaios individuais para cada fluorocromo e o ensaio multicolor foram encontrados para todos os parâmetros (0,99/0,99; 0,96/0,96; 0,93/0,92; 0,98/0,98 e 0,99/0,99 para A, B, C, D e E; P < 0,01, respectivamente), e a diferença média entre as abordagens não ultrapassou 0,84.