Intein prp8 em fungos dermatófitos: identificação molecular e aspectos evolutivos.

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Garces, Hans Garcia
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Dermatófitos; Intein PRP8; Identificação molecular; filogenia; Dermatophytes; PRP8 intein; molecular identification; phylogeny
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/152773

Os dermatófitos são um grupo de fungos constituídos pelos gêneros Trichophyton, Epidermophyton e Microsporum que têm a habilidade de degradar a queratina. É por essa razão que podem colonizar a pele do homem e dos animais, embora também possam crescer no ambiente, geralmente em solos com restos de queratina. As características morfológicas permitem a identificação e classificação taxonômica das espécies, mas realizar um diagnóstico baseado nestas características pode levar a erros. As técnicas moleculares ajudam a realizar diagnósticos mais rápidos baseados em uma identificação molecular e também têm possibilitado importantes avanços quanto aos estudos filogenéticos, sendo as sequências ITS1-5.8S-ITS2 as mais utilizadas. No entanto, estes marcadores não são suficientes para identificar e elucidar todas as relações filogenéticas e taxonômicas dos dermatófitos devido à ampla variedade de espécies existentes, -sendo necessário novos marcadores genéticos, como o intein PRP8. Os inteins são elementos genéticos parasitas, de natureza proteica, presentes em alguns fungos e estão associados a importantes genes altamente conservados. Ointein PRP8 está localizado nogenePRP8 que codifica para a proteína PRP8 associada ao complexo do spliciosoma. O presente estudo visa caracterizar o intein PRP8 em fungos dermatófitos, de forma a empregar estes elementos genéticos como marcadores moleculares para uma correta identificação destas espécies e elucidações das relações filogenéticas do grupo. Para realizar este objetivo, foram caracterizadasmolecularmente 45 cepas usando as regiões nucleares ribossomais ITS1-5.8S-ITS2 e D1/D2 e posteriormente a região do intein PRP8 de 40 cepas foi sequenciada para determinar as características do intein. A presença do intein foi comprovada em todas as espécies avaliadas, apresentando um full-intein com uma Homing Endonuclease presumivelmente ativa. As construções filogenéticas obtidas usando as sequências do intein são correspondentes as construídas a partir de genes nucleares ribossomais, demonstrando a validade do intein para ser incluído em futuros estudos filogenético associados a taxonomia e determinação de espécies. O polimorfismo na região da Homing Endonuclease permitiu a identificação de algumas espécies de Microsporum mediante um ensaio de PCR-Eletroforese.