Avaliação dos efeitos antineoplásicos do extrato bruto e frações de folhas de Psidium guajava em linhagens celulares humanas de glioblastoma

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Gomes, Isabella [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: GBM; Antioxidantes; Flavonoides; Terpenos; Psidium guajava; Antioxidants; Flavonoids; Terpenes
• Link de acesso: https://hdl.handle.net/11449/259638

Psidium guajava (goiaba) é uma árvore frutífera usada na medicina popular, por suas propriedades anti-inflamatórias, antidiarreicas e cicarizantes, entre outras. Investigações mostram efeitos antitumorais de compostos bioativos de P. guajava, mas há escassez de estudos que avaliam sua ação terapêutica no glioblastoma (GBM). O GBM é um tumor primário cerebral com baixa sobrevida e alta taxa de mortalidade, nesse sentido, a investigação de novos compostos que regulem a tumorigênese é estimulada. O objetivo deste projeto consistiu em padronizar o extrato de folhas de P. guajava e avaliar o potencial efeito antitumoral em linhagens celulares de GBM (A172 e U87-MG). As propriedades fitoquímicas e antioxidantes do extrato bruto (EB) de P. guajava e frações, foram submetidas a avaliações qualitativas, quantitativas e cromatografias em camada delgada (HPTLC) e líquida (HPLC); e avaliação de citotoxicidade por hemólise. Ensaios de proliferação e viabilidade foram realizados com fração acetato de etila (FAE), selecionada após as análises fitoquímicas, em células endoteliais (EA-hy 926) e tumorais (A172 e U87-MG). O potencial da FAE sobre proliferação, genotoxicidade, inflamação e invasão foi avaliado nas linhagens tumorais. A proteína antiapoptótica (BCL-2), pró-apoptótica (BAX) e metaloproteinases (MMP2 e MMP9) foram analisadas por Western blotting. As proteínas inibidoras do fator nuclear-κB (IKK), Tirosina-Proteína Quinases (JAK1 e JAK3), Proto-Oncogene (MDM2), ativador de transcrição 3 (STAT3) e anexina A1 (AnxA1) foram analisadas por imunocitoquímica. Os níveis de interleucina (IL-6) e interferon gama (INF-γ) foram quantificados no sobrenadante do lisado celular e no meio de cultivo. A análise da expressão gênica de TP53, NFkB e mTOR foi avaliada por RT-PCR. A análise cromatográfica confirmou a presença de Quercetina, Ácido Gálico, Catequina e Miricetina. O teste de hemólise indicou ausência de citotoxicidade nas concentrações testadas. Após os testes de viabilidade e citotoxicidade, determinou-sea concentração de 25% para A172 e 15% para a U87-MG em 24 horas. O tratamento com a FAE não alterou a morfologia das células endotelias e tumorais; no entanto, observou-se efeito inibitório da proliferação celular da linhagem A172 após o tratamento com FAE na concentração de 25% e nas linhagens U87-MG e EA-hy926 na concentração de 15% em 24 horas. Ainda, o tratamento com a FAE nas linhagens tumorais, A172 e U87-MG, promoveu danos significativos ao DNA. Em A172, o tratamento com FAE induziu INF-γ no sobrenadante do lisado; no entanto, reduziu nosobrenadante do meio de cultivo. Em U87-MG, o tratamento reduziu INF-γ no sobrenadante do lisado; bem como no sobrenadante do meio. O tratamento não alterou a expressão de IL-6 no sobrenadante do lisado celular em ambas as linhagens. Entretanto, houve redução de IL-6 no sobrenadante do meio de cultivo da A172; bem como aumento de IL-6 no sobrenadante do meio de cultivo da U87-MG. Nas células A172, a FAE induziu AnxA1; contudo, na linhagem U87-MG a FAE reduziu significativamente a expressão dessa proteína. A expressão de IKK foi aumentada em ambas as linhagens. A expressão de JAK1 e JAK3 foi reduzida em A172 e U87-MG. A expressão de MDM2, aumentou em A172 e reduziu em U87-MG. STAT3 aumentou em A172 e reduziu na U87-MG. No sobrenadante do lisado celular, a expressão de AnxA1 foi induzida em A172; no entanto, foi reduzida em U87-MG após o tratamento com FAE. BAX não foi alterada significativamente. MMP2 e MMP9 foram reduzidas em A172. A expressão proteica de MMP2 e MMP9 foi induzida em U87-MG. O tratamento com FAE reduziu a expressão dos genes mTOR, TP53 e NFkB nas linhagens A172 e U87-MG. FAE induziu a morte celular nas linhagens tumorais. O tratamento com a FAE inibiu a proliferação celular, induziu a apotose e regulou mediadores envolvidos na tumorigênese, com potencial para ser explorada em pesquisas futuras.