Produção, expressão e caracterização da metalocarboxipeptidase recombinante

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Fernandes, Gabriela Cabral [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: caracterização cinética e estrutural; Carboxipeptidase; Metalocarboxipeptidasse; Mineração de genoma; Structural and kinetic characterization; Carboxypeptidase; Metalocarboxypeptidase; Genome mining
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/157083

A mineração no genoma de Chitinophaga sp. (8Mb), uma bactéria gram-negativa, isolada de um consórcio bacteriano degradador de biomassa, permitiu acesso ao gene Cht_4039 que possui um motivo de HEXXH característico para as carboxipeptidases (CPs) termoestáveis da família M32. O gene foi expresso em Escherichia coli e a enzima recombinante (ChtCP) foi purificada e caracterizada bioquimicamente em detalhes. Esta carboxipeptidase apresentou atividade máxima a 65°C, conservando 60% da atividade à 80ºC. O pH ótimo foi de 7.5. Esta metaloenzima foi ativada 100% com Mn2+ e 150% com Co2+. A estrutura cristalina da ChtCP foi determinada a uma resolução de 1,2 Å. Quando em contato com íons metálicos teve seu ponto de fusão (Tm) acrescido em até 50% mantendo sua estrutura nativa. Em resumo, este estudo mostra que a ChtCP é um membro termoestável da família M32 CP que apresenta atividade enzimática em um amplo espectro de temperatura (de 20 °C à 99 °C) e ativação na presença de íons metálicos (Co+2, Cr+2, Mg+2, Mn+2 ou Zn+2), características importantes na aplicação industrial.