Estudo de peptídeos antimicrobianos contra Candida albicans e avaliação da segurança em modelo Zebrafish (Danio rerio)

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Vicentin, Mariana Cristina Galeane
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Peptídeos antimicrobianos; candidíase; córion; espectrometria de massas; toxicidade; zebrafish
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/190939

Devido ao aumento das doenças fúngicas, do uso indiscriminado de antimicrobianos, associados ao aparecimento de cepas resistentes e formadoras de biofilmes, é essencial a busca pelo desenvolvimento de novos antifúngicos mais eficientes. As espécies de Candida são conhecidas pela capacidade de infectar humanos, sendo a formação de biofilmes um dos fatores de virulência mais importantes. No estudo interação patógeno-hospedeiro, bem como para eficácia terapêutica e segurança, algumas vantagens no uso de modelos animais alternativos são a redução de tempo de resposta em experimentos, eficiência e baixo custo quando comparado ao uso de camundongos. Desta forma, moléculas antifúngicas estão sendo testadas nestes animais alternativos, como Danio rerio (Zebrafish), um vertebrado que apresenta rápida reprodução e homologia genética e funcional com os mamíferos. Em relação às moléculas em testes, há um crescente estudo de peptídeos oriundos de venenos e da hemolinfa de insetos, como novos compostos antifúngicos, os quais possam apresentar além de boa atividade, baixa toxicidade e não-teratogenicidade. Neste trabalho, foram estudados peptídeos análogos de Mastoparanos de vespas (MKs) cuja atividade antimicrobiana já é conhecida, previamente sintetizados com modificações nas suas características estruturais, como número de resíduos de Lisina e carga líquida. Levando em consideração as características estruturais dos MKs, outros quatro peptídeos foram sintetizados e estudados, dos quais dois peptídeos (PepM1; PepM2) são análogos do antimicrobiano Moricin C3, derivado da hemolinfa de Galleria mellonella, e dois peptídeos (PepM3; PepM4) análogos dos IsCT, uma classe oriunda do veneno do escorpião Opisthacanthus madagascariensis. Os resultados revelaram que as modificações quanto ao número de resíduos carregados e a distribuição em relação à fração hidrofóbica na cadeia peptídica, influenciaram tanto na atividade anti-Candida como em relação à toxicidade. Os análogos mostraram uma promissora atividade antifúngica contra Candida albicans, com a concentração inibitória mínima (CIM) variando de 15,62 a 250 µg/mL, apresentaram diferenças em relação à toxicidade em Zebrafish e também à citotoxicidade em queratinócitos de pele. Aqueles com melhores resultados da CIM foram selecionados para testes em espectrometria de massas para estudo da permeabilidade do córion do embrião de Zebrafish, onde foi visto também, alterações no comportamento destes peptídeos de acordo com as diferenças das suas características estruturais. Além disso, a metodologia de infecção por imersão usando embriões de Zebrafish foi padronizada neste trabalho frente C. albicans e, através de mapeamento por imagem, foi possível verificar o estabelecimento da infecção e aderência do patógeno.